| 查看: 1538 | 回复: 2 | ||
[求助]
求助：提取的总基因组，跑胶条带漂移，每次跑胶条带都不一样！！！
|
|
紧急求助 实验需要提取巨噬细胞的基因组，然后用内切酶进行酶切。 结果发现每次跑胶，同样的基因组样品跑的条带大小总是不一样，没有重复性，有时跑到10000多bp，有时又跑到了几百bp。 实验过程为 1.先用1%福尔马林对巨噬细胞进行胶连； 2.用2M的甘氨酸中和福尔马林； 3.用裂解液（500 μl 10 mM Tris-HCl pH 8.0, 10 mM NaCl, 0.2% Igepal CA-630 and 50 μl protease inhibitors）对细胞进行裂解，释放细胞核； 4.加入SDS继续裂解细胞； 5.加入Triton X-100，中和SDS； 6.取样跑琼脂糖电泳进行检测。 电泳出现了很奇怪的现象，提取的基因组在不同时间的电泳条带不一样，稀释前和稀释后的条带也不一样，结果如下：  2，3泳道是刚提取的基因组跑的琼脂糖胶，条带在15000bp左右，而1，4泳道是将提取的基因组放置一段时间（6个小时左右）后跑的琼脂糖胶，条带减小到了250-1000bp之间.  把基因组酶切前的样品：切前1 和 切前2 稀释10倍后，条带大小由7500bp左右减小到了1000bp左右（条带：切前1×10和切前2×10），而且酶切前和酶切后的条带区别不大（见：切前1和切后1；切前2和切后2）。 很奇怪的现象，大家在实验中遇到过这样的问题吗？实验卡在这里，大家帮我分析下，谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有153人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2013-07-11 11:20:33
yuxiongbao
铁虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 843.3
- 帖子: 151
- 在线: 22.4小时
- 虫号: 2061050
- 注册: 2012-10-14
- 性别: GG
- 专业: 动脉粥样硬化与动脉硬化
3楼2013-07-19 10:43:26