包涵体纯化重复性差
求助:本人目的蛋白大小14kd，his tag，含二硫键，表达在包涵体里。现在已经做过几次纯化，先用超声破碎，在超声洗涤3次，再用6M盐酸胍溶解，再稀释复性，透析除去盐酸胍，透析时间3~4天，在上镍柱纯化。现在纯化最高做出来1mg/ml的，但是很不稳定，有几次高点，后来再做就做不出来高浓度的了。重复性很差。我每次都做SDS-PAGE，前期包涵体处理应该没有啥问题，每次都差不多，后面纯化的SDS-PAGE显示蛋白挂柱的情况不好，我估计是复性这个环节出了问题，我做包涵体复性做的少，不知道这中间哪个步骤出了问题，想请教坛子里的大神们，帮忙分析下原因，那个环节有问题会导致后面纯化的浓度低。谢谢啦
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一定要用盐酸胍啊？试过尿素没？我是很不喜欢用盐酸胍的，即使用，也可以摸摸用低一点的浓度试试能不能溶解，不一定要用到那么高。
我基本上都用盐酸胍，溶解性好，尿素用过，后来还是换了盐酸胍
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顶顶顶，不要沉
顶顶顶，不要沉
复性过程中产生沉淀有时候是没办法避免的 建议你复性时间不要那么长
楼主有你这个方法的详细步骤吗？
变性后先用镍柱纯化 然后把基本纯的蛋白复性 能增加点复性率吧
用脲不能溶吗，用脲溶解后上柱纯化再透析啊