| 查看: 2077 | 回复: 16 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
包涵体纯化重复性差 已有3人参与
|
||
| 求助:本人目的蛋白大小14kd，his tag，含二硫键，表达在包涵体里。现在已经做过几次纯化，先用超声破碎，在超声洗涤3次，再用6M盐酸胍溶解，再稀释复性，透析除去盐酸胍，透析时间3~4天，在上镍柱纯化。现在纯化最高做出来1mg/ml的，但是很不稳定，有几次高点，后来再做就做不出来高浓度的了。重复性很差。我每次都做SDS-PAGE，前期包涵体处理应该没有啥问题，每次都差不多，后面纯化的SDS-PAGE显示蛋白挂柱的情况不好，我估计是复性这个环节出了问题，我做包涵体复性做的少，不知道这中间哪个步骤出了问题，想请教坛子里的大神们，帮忙分析下原因，那个环节有问题会导致后面纯化的浓度低。谢谢啦 |
回复此楼» 猜你喜欢
中科院杭州医学所招收博士生一名（生物分析化学、药物递送）
已经有3人回复
-
A期刊撤稿
已经有5人回复
-
临港实验室与上科大联培博士招生1名
已经有8人回复
-
26申博自荐
已经有7人回复
-
想换工作。大多数高校都是 评职称时 认可5年内在原单位取得的成果吗？
已经有4人回复
-
带资进组求博导收留
已经有9人回复
-
求助大佬们，伤口沾上了乙腈
已经有6人回复
-
最近几年招的学生写论文不引自己组发的文章
已经有9人回复
yxncas-2012
木虫 (正式写手)
- 应助: 30 (小学生)
- 金币: 2052.2
- 散金: 15
- 红花: 4
- 帖子: 352
- 在线: 95小时
- 虫号: 2147898
- 注册: 2012-11-26
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
9楼2017-01-13 14:28:50
2楼2017-01-11 14:53:24
3楼2017-01-11 15:00:29
4楼2017-01-11 15:02:41