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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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mikkoma

新虫 (初入文坛)

[求助] 包涵体纯化重复性差 已有3人参与

求助:本人目的蛋白大小14kd,his tag,含二硫键,表达在包涵体里。现在已经做过几次纯化,先用超声破碎,在超声洗涤3次,再用6M盐酸胍溶解,再稀释复性,透析除去盐酸胍,透析时间3~4天,在上镍柱纯化。现在纯化最高做出来1mg/ml的,但是很不稳定,有几次高点,后来再做就做不出来高浓度的了。重复性很差。我每次都做SDS-PAGE,前期包涵体处理应该没有啥问题,每次都差不多,后面纯化的SDS-PAGE显示蛋白挂柱的情况不好,我估计是复性这个环节出了问题,我做包涵体复性做的少,不知道这中间哪个步骤出了问题,想请教坛子里的大神们,帮忙分析下原因,那个环节有问题会导致后面纯化的浓度低。谢谢啦
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yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一定要用盐酸胍啊?试过尿素没?我是很不喜欢用盐酸胍的,即使用,也可以摸摸用低一点的浓度试试能不能溶解,不一定要用到那么高。
9楼2017-01-13 14:28:50
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2楼2017-01-11 14:53:24
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mikkoma

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 415881168 at 2017-01-11 14:53:24

同道中人?
3楼2017-01-11 15:00:29
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mikkoma

新虫 (初入文坛)

我的复性液中加了L-Arg,这个对后面的挂柱是不是有影响?
大神们help
4楼2017-01-11 15:02:41
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