应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 包涵体纯化重复性差
171/2返回列表12下一页
查看: 2211  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

mikkoma

新虫 (初入文坛)

[求助] 包涵体纯化重复性差 已有3人参与

求助:本人目的蛋白大小14kd，his tag，含二硫键，表达在包涵体里。现在已经做过几次纯化，先用超声破碎，在超声洗涤3次，再用6M盐酸胍溶解，再稀释复性，透析除去盐酸胍，透析时间3~4天，在上镍柱纯化。现在纯化最高做出来1mg/ml的，但是很不稳定，有几次高点，后来再做就做不出来高浓度的了。重复性很差。我每次都做SDS-PAGE，前期包涵体处理应该没有啥问题，每次都差不多，后面纯化的SDS-PAGE显示蛋白挂柱的情况不好，我估计是复性这个环节出了问题，我做包涵体复性做的少，不知道这中间哪个步骤出了问题，想请教坛子里的大神们，帮忙分析下原因，那个环节有问题会导致后面纯化的浓度低。谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-01-11 14:43:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

十四_14

荣誉版主 (正式写手)
你复性时间3-4天  是不是时间太长了？一个白天加一晚上过夜不够吗？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2017-01-12 09:37:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

415881168


发自小木虫IOS客户端
2楼2017-01-11 14:53:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mikkoma

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 415881168 at 2017-01-11 14:53:24

同道中人？
回复此楼
3楼2017-01-11 15:00:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mikkoma

新虫 (初入文坛)
我的复性液中加了L-Arg，这个对后面的挂柱是不是有影响？
大神们help
赞一下 回复此楼
4楼2017-01-11 15:02:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XMC-7

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
稀释复性，稀释多少倍，体积多少。透析3-4天，有什么依据吗，一般一天一夜换液3次足足够了
赞一下 回复此楼
能帮的帮，难事求助的心情咱也经历过
6楼2017-01-13 08:37:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mikkoma

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by XMC-7 at 2017-01-13 08:37:44
稀释复性，稀释多少倍，体积多少。透析3-4天，有什么依据吗，一般一天一夜换液3次足足够了

50,或者100ml包涵体溶液稀释到1L复性液中，10-20倍。透析短了怕透析的不透彻。L-ARG对后面的挂柱会不会有影响？这次重新调整了复性液，把精氨酸去掉了，加了gly，但是效果还是不好，复性过程中就出现絮状沉淀了，是不是复性失败了？
赞一下 回复此楼
7楼2017-01-13 14:02:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mikkoma

新虫 (初入文坛)
顶顶顶，不要沉
回复此楼
8楼2017-01-13 14:08:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一定要用盐酸胍啊？试过尿素没？我是很不喜欢用盐酸胍的，即使用，也可以摸摸用低一点的浓度试试能不能溶解，不一定要用到那么高。
赞一下 回复此楼
9楼2017-01-13 14:28:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mikkoma

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yxncas-2012 at 2017-01-13 14:28:50
一定要用盐酸胍啊？试过尿素没？我是很不喜欢用盐酸胍的，即使用，也可以摸摸用低一点的浓度试试能不能溶解，不一定要用到那么高。

我基本上都用盐酸胍，溶解性好，尿素用过，后来还是换了盐酸胍
赞一下 回复此楼
10楼2017-01-13 16:34:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mikkoma 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 352求调剂 +3 大米饭！ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123！
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +3 这么名字咋样 2026-03-22 4/200 2026-03-22 17:56 by 云民大李老师
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 4/200 2026-03-22 10:25 by QGZDSYS
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 070300化学319求调剂 +7 锦鲤0909 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:46 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +10 yy要上岸呀 2026-03-17 10/500 2026-03-21 03:14 by JourneyLucky
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 材料与化工专硕调剂 +7 heming3743 2026-03-16 7/350 2026-03-20 19:31 by zhukairuo
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭