| 查看: 2238 | 回复: 16 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
包涵体纯化重复性差 已有3人参与
|
||
| 求助:本人目的蛋白大小14kd，his tag，含二硫键，表达在包涵体里。现在已经做过几次纯化，先用超声破碎，在超声洗涤3次，再用6M盐酸胍溶解，再稀释复性，透析除去盐酸胍，透析时间3~4天，在上镍柱纯化。现在纯化最高做出来1mg/ml的，但是很不稳定，有几次高点，后来再做就做不出来高浓度的了。重复性很差。我每次都做SDS-PAGE，前期包涵体处理应该没有啥问题，每次都差不多，后面纯化的SDS-PAGE显示蛋白挂柱的情况不好，我估计是复性这个环节出了问题，我做包涵体复性做的少，不知道这中间哪个步骤出了问题，想请教坛子里的大神们，帮忙分析下原因，那个环节有问题会导致后面纯化的浓度低。谢谢啦 |
回复此楼» 猜你喜欢
313求调剂
已经有4人回复
-
311求调剂一志愿合肥工业大学
已经有6人回复
-
0703化学调剂，求导师收
已经有11人回复
-
284求调剂
已经有5人回复
-
求调剂
已经有4人回复
-
求调剂
已经有4人回复
-
总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂
已经有7人回复
-
070300化学求调剂
已经有6人回复
-
070300一志愿211，312分求调剂院校
已经有7人回复
-
085600 295分求调剂
已经有10人回复
4楼2017-01-11 15:02:41
2楼2017-01-11 14:53:24
3楼2017-01-11 15:00:29
5楼2017-01-12 09:37:29
