应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 包涵体纯化重复性差
171/2返回列表12下一页
查看: 2561  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

mikkoma

新虫 (初入文坛)

[求助] 包涵体纯化重复性差 已有3人参与

求助:本人目的蛋白大小14kd，his tag，含二硫键，表达在包涵体里。现在已经做过几次纯化，先用超声破碎，在超声洗涤3次，再用6M盐酸胍溶解，再稀释复性，透析除去盐酸胍，透析时间3~4天，在上镍柱纯化。现在纯化最高做出来1mg/ml的，但是很不稳定，有几次高点，后来再做就做不出来高浓度的了。重复性很差。我每次都做SDS-PAGE，前期包涵体处理应该没有啥问题，每次都差不多，后面纯化的SDS-PAGE显示蛋白挂柱的情况不好，我估计是复性这个环节出了问题，我做包涵体复性做的少，不知道这中间哪个步骤出了问题，想请教坛子里的大神们，帮忙分析下原因，那个环节有问题会导致后面纯化的浓度低。谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-01-11 14:43:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

十四_14

荣誉版主 (正式写手)
你复性时间3-4天  是不是时间太长了？一个白天加一晚上过夜不够吗？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2017-01-12 09:37:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

415881168


发自小木虫IOS客户端
2楼2017-01-11 14:53:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mikkoma

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 415881168 at 2017-01-11 14:53:24

同道中人？
回复此楼
3楼2017-01-11 15:00:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mikkoma

新虫 (初入文坛)
我的复性液中加了L-Arg，这个对后面的挂柱是不是有影响？
大神们help
赞一下 回复此楼
4楼2017-01-11 15:02:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XMC-7

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
稀释复性，稀释多少倍，体积多少。透析3-4天，有什么依据吗，一般一天一夜换液3次足足够了
赞一下 回复此楼
能帮的帮，难事求助的心情咱也经历过
6楼2017-01-13 08:37:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mikkoma

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by XMC-7 at 2017-01-13 08:37:44
稀释复性，稀释多少倍，体积多少。透析3-4天，有什么依据吗，一般一天一夜换液3次足足够了

50,或者100ml包涵体溶液稀释到1L复性液中，10-20倍。透析短了怕透析的不透彻。L-ARG对后面的挂柱会不会有影响？这次重新调整了复性液，把精氨酸去掉了，加了gly，但是效果还是不好，复性过程中就出现絮状沉淀了，是不是复性失败了？
赞一下 回复此楼
7楼2017-01-13 14:02:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mikkoma

新虫 (初入文坛)
顶顶顶，不要沉
回复此楼
8楼2017-01-13 14:08:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一定要用盐酸胍啊？试过尿素没？我是很不喜欢用盐酸胍的，即使用，也可以摸摸用低一点的浓度试试能不能溶解，不一定要用到那么高。
赞一下 回复此楼
9楼2017-01-13 14:28:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mikkoma

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yxncas-2012 at 2017-01-13 14:28:50
一定要用盐酸胍啊？试过尿素没？我是很不喜欢用盐酸胍的，即使用，也可以摸摸用低一点的浓度试试能不能溶解，不一定要用到那么高。

我基本上都用盐酸胍，溶解性好，尿素用过，后来还是换了盐酸胍
赞一下 回复此楼
10楼2017-01-13 16:34:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mikkoma 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 v7Aev8ORQjin 2026-08-22 3/150 2026-08-23 20:58 by 0p9y1isJp2jM
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 4/200 2026-08-23 20:55 by 0p9y1isJp2jM
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 19:55 by lXgU0RvNTDC9
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 19:31 by lXgU0RvNTDC9
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 19:22 by lXgU0RvNTDC9
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 4/200 2026-08-23 15:30 by KM5EcsNQRBPn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 6/300 2026-08-23 14:21 by KM5EcsNQRBPn
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +15 羊腰板 2026-08-21 16/800 2026-08-23 10:45 by process2012
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 03:40 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 炎黄贵胄 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭