斑马鱼整体原位杂交结果展示，原因分析
斑马鱼整体原位杂交做了无数次了，每次都不是想要的结果！
下面三幅图分别是文献上的结果和我自己的实验结果，想要的体节上那种点状表达一直没有做出来！
各位高人，求教如下问题：
提问题之前，我先告诉高人，我的探针是从Exiqon公司买来的LNA probe，也就是特异性强的锁定核酸探针，抗体是罗氏的，显色试剂用过罗氏的，也用过博士德的，蛋白酶K也是罗氏的！
1，与文献相似，我也做出来了眼睛前方鼻嗅上皮区的染色，可是文献中体节上所出现的点状显色，我一次也没有做出来过？请问原因何在？？
2，无数次实验中，只有两次我做出来很快显蓝的情况，后来每次再做要不是一点也不显色，要不就是呈现棕黄色（见最后一幅图）！请问原因何在？
请高人指点啊！
万分感激啊！
文献结果：
个人结果：
奇怪的棕色显色
文献结果
个人结果
奇怪的棕色显色
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今日热帖
京公网安备 11010802022153号
这个看起来真够高深的，真有意思。有木有高手跟他讨论一下。
有木有高人出来指点一下呢？？？
感觉楼主的背景色很深啊？我没有做过，推测能否延长杂交后的漂洗时间，降低信噪比（背景色），突出你的结果
是个不错的建议，我试试！
你已经成功过，说明你所说的探针和试剂是没问题的，没有染出来很有可能是胚胎固定出现了差错，建议重新配置固定液，重新固定胚胎（一个月内）
谢谢你的建议，我也考虑固定可能是个问题！
你能详细告诉我你的固定液是怎么配置的吗？？？
谢谢
，
就是经常用的4%PFA in PBS， 我们都是有人配一大堆一起用，所以具体的我也不清楚，加热溶解，味道挺大，分装使用，不能反复冻融使用，4度摇床固定不要时间太久，12hpf左右就可以了