应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR凝胶电泳图求助
131/2返回列表12下一页
查看: 2214  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

喝茶的面包

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR凝胶电泳图求助 已有2人参与

自己设计的引物，PCR过后凝胶电泳，拍出来的图如附件，最右边没有加DNA模板，用DEPC处理水代替的，请问跑出来的条带是非特异性扩展的产物吗？

PCR凝胶电泳图求助
PCR.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-01-15 13:51:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

奇怪人生123

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-15 22:30:56
看了你的电泳图，听了你的描述，有疑问：1.你说用DEPC水作为模板的阴性对照，位置具体是哪一电泳道？最后在电泳图上标明。（直说最右边真不清楚你说的是哪一个）2.你的目的条带是多大的？
看电泳图，中间有一条比较亮的条带，似乎是你的目的条带。同时，也有许多杂带（非特异性条带），怀疑与PCR时退火温度的选择有关。
赞一下(1人) 回复此楼
实时荧光定量PCR（TaqMan探针法）欢迎和大家探讨~
2楼2016-01-15 16:20:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-15 22:31:10
连水都有条带，要不就是水污染了模板，要不就是实验出现了错误；
如果排除以上的可能性，那就是引物自身的扩增，可以考虑更换引物。
赞一下 回复此楼
3楼2016-01-15 16:21:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

喝茶的面包

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 奇怪人生123 at 2016-01-15 16:20:46
看了你的电泳图，听了你的描述，有疑问：1.你说用DEPC水作为模板的阴性对照，位置具体是哪一电泳道？最后在电泳图上标明。（直说最右边真不清楚你说的是哪一个）2.你的目的条带是多大的？
看电泳图，中间有一条比较 ...

你好，DEPC水作为模板的阴性对照是在泳道5，采用MarkⅡ作为参照，目的产物的大小根据基因库里下载的序列算出来理论值为198bp（是否准确还有待验证），退火温度为65℃。请问，中间的条带不是引物二聚体吧？
PCR凝胶电泳图求助-1
PCR.jpg
赞一下 回复此楼
4楼2016-01-15 19:34:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

喝茶的面包

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 大海一孤舟 at 2016-01-15 16:21:08
连水都有条带，要不就是水污染了模板，要不就是实验出现了错误；
如果排除以上的可能性，那就是引物自身的扩增，可以考虑更换引物。

引物是自己设计的简并引物，更换引物的话，需要花费很多精力，所以需要确定具体哪里出问题了，DEPC处理水，我再做次实验验证一下。
赞一下 回复此楼
5楼2016-01-15 19:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

奇怪人生123

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你中间较亮的条带肯定不是引物二聚体，引物二聚体大小很小，电泳后100 bp都不一定能达到。而且，引物二聚体也不是这个样子的。
如果确定没有在阴性对照误加入模板，我就很怀疑是否你的水或者试剂有DNA污染。首先确定水是需要是无菌水（最好用刚灭过菌或新拆封的），接下来需要排除引物和酶是否有污染。
赞一下 回复此楼
实时荧光定量PCR（TaqMan探针法）欢迎和大家探讨~
6楼2016-01-17 22:14:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

997821428

铜虫 (小有名气)
请问一下，你们这些照片是用凝胶成像仪拍出来？我的就拍不出来这种效果

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
姐不约，咱不约。啥？为啥？姐爱妹子
7楼2016-02-18 23:08:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

8023xz

铁杆木虫 (文坛精英)
除了上述这些，看看pcr管是不是有问题

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-02-18 23:13:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
9楼2016-02-19 00:30:36
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

喝茶的面包

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 997821428 at 2016-02-18 23:08:00
请问一下，你们这些照片是用凝胶成像仪拍出来？我的就拍不出来这种效果

是采用凝胶成像仪拍出来的图，除了mark效果还行以外，pcr产物进行凝胶电泳后拍照效果不是很理想，具体原因还在查找。您指的拍不出这种效果具体是什么呢？
赞一下 回复此楼
10楼2016-03-02 15:34:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 喝茶的面包 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:59 by zNcEhTcH7ihq
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +6 两三岁ss 2026-09-14 6/300 2026-09-15 20:17 by 只吃肉葡萄
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 17:35 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 17:23 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:35 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 16:26 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-15 15:50 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-15 15:14 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 15:02 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 14:58 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 14:50 by VMDqgnlKimtZ
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 14:25 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-15 14:14 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 09:38 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭