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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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erin090506

新虫 (小有名气)

[求助] 新手提取RNA附图，求助高手鉴定，感激不尽

用天根试剂盒提取的RNA，用普通琼脂糖凝胶电泳，点样量1500ng左右，120V电压，缓冲液新配的。请高手鉴定质量，如果做RT-PCR是否可用？
另，用nanodrop 2000 检测浓度为600-1200ng/ul，260/180为2.15左右，260/230普遍偏低，1—1.5。网上说，偏低是由于试剂残留，怎样有效去除呢？
RNA已经溶解于RNase-Free的dd水中，具体应该怎么操作进行洗涤？
图片用手机照的，质量不高，新虫金币也有限，请见谅
新手提取RNA附图，求助高手鉴定，感激不尽
20131121_113323.jpg
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实实在在做科研
1楼 2013-11-21 13:07:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
5楼: Originally posted by erin090506 at 2013-11-21 15:16:49
基因组污染是不是应该有明确的条带呀？
我的提取过程是用过DNase的，室温15分钟。
两条主带上面那些白色的东西，您认为是基因组DNA？...

我认为是的

给个图片给你参考，我自己提的

新手提取RNA附图，求助高手鉴定，感激不尽-1
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8楼2013-11-21 20:08:38
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erin090506

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-21 13:36:23
基因组DNA污染非常严重

基因组污染是不是应该有明确的条带呀？
我的提取过程是用过DNase的，室温15分钟。
两条主带上面那些白色的东西，您认为是基因组DNA？
赞一下(1人) 回复此楼
实实在在做科研
5楼2013-11-21 15:16:49
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-21 13:35:56
RNA条带有些多，是植物叶片提的RNA吗？点样孔位置亮，而且marker的点样孔也亮，是什么原因？如果样品里有gDNA，消化后可以接着做RT-PCR。
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2楼2013-11-21 13:17:08
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erin090506

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-21 13:17:08
RNA条带有些多，是植物叶片提的RNA吗？点样孔位置亮，而且marker的点样孔也亮，是什么原因？如果样品里有gDNA，消化后可以接着做RT-PCR。

是水稻叶片提取的。点样孔量是不是点的样品多的原因，新手也不懂。提取过程中已经经过DNase消化了呀。严格按照说明书执行的。
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实实在在做科研
3楼2013-11-21 13:21:36
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
基因组DNA污染非常严重
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4楼2013-11-21 13:36:23
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darkstar119

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-21 20:04:58
1.可按照DNase試劑的洗滌方法仔細清洗看看。
2.是否可試著降低電壓跑看看~ 有時候跑太快也會有拖尾
3.若提取total RNA的步驟處理很OK的話，DNase不一定要加。
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6楼2013-11-21 15:33:49
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erin090506

新虫 (小有名气)
帮帮忙啊大伙儿，感激不尽。求高手啊求高手
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实实在在做科研
7楼2013-11-21 20:02:05
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水一315

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-07 15:30:09
260/280 在2.15，按理可以说明没有DNA和蛋白质污染。做RT-PCR只要保证没有gDNA污染就可以了，没啥可担心的
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What ever is worth doing is worth doing well.
9楼2013-11-21 23:29:17
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erin090506

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-21 20:08:38
我认为是的

给个图片给你参考，我自己提的

...

太漂亮了，你用的是试剂盒吗？有没有什么建设性的心得呀？比如哪步骤应注意什么？
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实实在在做科研
10楼2013-11-22 00:00:36
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