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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手提取RNA附图，求助高手鉴定，感激不尽
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-22 10:08:53
引用回帖:
3楼: Originally posted by erin090506 at 2013-11-21 13:21:36
是水稻叶片提取的。点样孔量是不是点的样品多的原因，新手也不懂。提取过程中已经经过DNase消化了呀。严格按照说明书执行的。...

点样孔亮通常是因为有核酸蛋白复合体。因为你的marker的点样孔也比较亮，不清楚是什么问题。你的RNA还可以，可以接着做RT。
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11楼2013-11-22 01:34:05
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erin090506

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-22 01:34:05
点样孔亮通常是因为有核酸蛋白复合体。因为你的marker的点样孔也比较亮，不清楚是什么问题。你的RNA还可以，可以接着做RT。...

非常感谢，等待回帖的日子不好过呀。谢谢你！我就是想知道为什么泳道里主带上面那么多白色的是什么东西，怎么才能有一个干净漂亮的条带。
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实实在在做科研
12楼2013-11-22 10:16:59
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erin090506

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 水一315 at 2013-11-21 23:29:17
260/280 在2.15，按理可以说明没有DNA和蛋白质污染。做RT-PCR只要保证没有gDNA污染就可以了，没啥可担心的

那您知道为什么主带上面会有白色的东西吗？怎么去除呀？
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实实在在做科研
13楼2013-11-22 10:20:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-22 16:43:06
引用回帖:
12楼: Originally posted by erin090506 at 2013-11-22 10:16:59
非常感谢，等待回帖的日子不好过呀。谢谢你！我就是想知道为什么泳道里主带上面那么多白色的是什么东西，怎么才能有一个干净漂亮的条带。...

因为你的marker的点样孔和样品的点样孔都亮，所以不知道是什么东西了。marker通常不会这样。你重新配胶，把loading buffer换一下再跑胶看看。
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14楼2013-11-22 11:13:33
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水一315

新虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-07 15:31:10
引用回帖:
13楼: Originally posted by erin090506 at 2013-11-22 10:20:34
那您知道为什么主带上面会有白色的东西吗？怎么去除呀？...

蛋白质污染一般会这样。但是你的marker孔也有，就说不过去了。大概是跑胶问题吧。。。不用管它，接着做下面的实验就好啦
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What ever is worth doing is worth doing well.
15楼2013-11-22 14:30:52
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-07 15:31:20
蛋白质没有洗干净 多洗一遍会好些 样品稍微再少些 下一次应该会没有什么问题啦
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16楼2013-11-22 21:14:50
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erin090506

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 脱水拂空 at 2013-11-22 21:14:50
蛋白质没有洗干净 多洗一遍会好些 样品稍微再少些 下一次应该会没有什么问题啦

谢谢！再试试看。已经溶RNase-free水的RNA还能怎么析出纯化吗？有什么方法呀？
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实实在在做科研
17楼2013-11-23 09:11:19
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erin090506

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 水一315 at 2013-11-22 14:30:52
蛋白质污染一般会这样。但是你的marker孔也有，就说不过去了。大概是跑胶问题吧。。。不用管它，接着做下面的实验就好啦...

非常感谢！有办法重新析出纯化吗？求指教
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实实在在做科研
18楼2013-11-23 09:13:09
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by erin090506 at 2013-11-23 09:11:19
谢谢！再试试看。已经溶RNase-free水的RNA还能怎么析出纯化吗？有什么方法呀？...

你可以用氯仿抽一次试试，再重复氯仿往下的提取过程。一般不主张这样，最好是重新提一次效果会好些。
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19楼2013-12-01 09:11:48
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

优秀区长优秀区长优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-07 15:31:49
在洗涤的时候可以考虑使用含氯化钠的乙醇进行洗涤。
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轻描淡写，浓墨重彩。
20楼2013-12-01 21:50:27
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