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油藏微生物16S rDNA的扩增没有任何条带出现，请问是什么因素导致？
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毕业论文是16S rDNA的扩增为基础的论文 引物4A、4S，扩增长片段，酶用的是商业用的taq聚合酶，体系是25ul体系，琼脂糖凝胶电泳 前期DNA提取都很顺利，跑电泳也出现了比较明显的条带，虽然不多但是还是很亮很明显。等到开始扩增16S rDNA的时候怪事就发生了，扩增后跑出来的电泳图完全没有任何条带出现。 最开始在老师的指导下将所有的酶和引物重新换过来做仍然是没有任何图条带的出现。因为模版当时只加了1ul而已所以觉得应该是模版太少了，改加了2ul仍然是没结果。之后又改过退火温度和延伸时间仍然是无功而返。只是有的时候会出现一条或者两条不是很明显的没有分界线的拖尾条带，两个月的实验时间中只出现过两次拖尾特别暗的不明显条带，之后就再也没出现过条带。 之后又在别人那里借了四个不同的模版回来接着做，结果仍然是没有任何条带出现。于是我开始怀疑是否是引物出现问题，老师说上一届的学生用这个引物做出来过要我绝对相信引物的可用性。还有十天多天就答辩了实验仍然是卡在PCR上不行，求助各位高手出现这样的情况要怎么解决。 下面是图 第二张惟一的条带还是拖尾条带，再次扩增的时候按同样的条件却怎么也不出现条带  DNA提取电泳图  16S rDNA扩增后电泳图 |
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