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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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panyax

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切之后跑胶,条带很暗,回收之后就什么都没有了 已有2人参与

我的片段大概700bp左右,我连了T载之后,再进行双酶切。酶切之后,进行电泳,条带很暗,切胶回收再跑胶,就没有条带了,请问有什么解决办法啊
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草溪河

铁虫 (著名写手)

首先回收的条带本身就暗,再者回收过程的损失也是很大的,其次再跑胶不可能把全部回收溶液上样吧,所以最后你胶上的实际DNA样量有多少就可想而知了

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2楼2015-12-23 10:29:56
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草溪河

铁虫 (著名写手)

要么回收时多回收几个条带,增加目的片段的量;要么考虑酶切回收后直接进行后续试验

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3楼2015-12-23 10:31:43
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panyax

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 草溪河 at 2015-12-23 10:31:43
要么回收时多回收几个条带,增加目的片段的量;要么考虑酶切回收后直接进行后续试验

这是我酶切之后跑的回收胶电泳图,第一个泳道是maker,2,3,4泳道是同一个样品,我把它们做一管回收的;5,6泳道是一个样品,我也是做一管回收的。这种情况,我是不是只能尝试下酶切胶回收之后,直接连表达载体试试看,因为做了几次都是这种情况
酶切之后跑胶,条带很暗,回收之后就什么都没有了
胶回收.jpg

4楼2015-12-23 10:52:41
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panyax

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 草溪河 at 2015-12-23 10:31:43
要么回收时多回收几个条带,增加目的片段的量;要么考虑酶切回收后直接进行后续试验

maker从上往下,依次是1500bp,1000bp,900bp,800bp,700bp,600bp,500bp,400bp,300bp,200bp,100bp
5楼2015-12-23 10:57:31
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草溪河

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by panyax at 2015-12-23 10:52:41
这是我酶切之后跑的回收胶电泳图,第一个泳道是maker,2,3,4泳道是同一个样品,我把它们做一管回收的;5,6泳道是一个样品,我也是做一管回收的。这种情况,我是不是只能尝试下酶切胶回收之后,直接连表达载体试试 ...

可以

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6楼2015-12-23 12:36:03
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吗子

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
每管酶切体系增大质粒量,比如20 uL体系里加10 uL质粒;然后多切几管质粒,比如10管。
你切的质粒太少了。
深秋
7楼2015-12-24 16:16:44
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Huobol

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
同意7楼,你切的质粒模板可能太少了,增加模板量,多做几管再胶回收吧!模板量也别加太多,双酶切不完全的话会出现3条的,我曾经出现过,模板加多了,吼吼~
让羽毛再飞一会儿
8楼2015-12-25 09:35:38
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panyax

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Huobol at 2015-12-25 09:35:38
同意7楼,你切的质粒模板可能太少了,增加模板量,多做几管再胶回收吧!模板量也别加太多,双酶切不完全的话会出现3条的,我曾经出现过,模板加多了,吼吼~

嗯,昨天重新抽了质粒,我感觉应该就是浓度的问题,回收出来了,谢谢

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9楼2015-12-25 10:50:34
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panyax

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 吗子 at 2015-12-24 16:16:44
每管酶切体系增大质粒量,比如20 uL体系里加10 uL质粒;然后多切几管质粒,比如10管。
你切的质粒太少了。

嗯,重新抽了质粒再酶切回收就成功了……

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10楼2015-12-25 10:51:15
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