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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切之后跑胶，条带很暗，回收之后就什么都没有了
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panyax

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切之后跑胶，条带很暗，回收之后就什么都没有了 已有2人参与

我的片段大概700bp左右，我连了T载之后，再进行双酶切。酶切之后，进行电泳，条带很暗，切胶回收再跑胶，就没有条带了，请问有什么解决办法啊
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1楼 2015-12-23 10:17:00
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吗子

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
每管酶切体系增大质粒量，比如20 uL体系里加10 uL质粒；然后多切几管质粒，比如10管。
你切的质粒太少了。
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深秋
7楼2015-12-24 16:16:44
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草溪河

铁虫 (著名写手)
首先回收的条带本身就暗，再者回收过程的损失也是很大的，其次再跑胶不可能把全部回收溶液上样吧，所以最后你胶上的实际DNA样量有多少就可想而知了

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2楼2015-12-23 10:29:56
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草溪河

铁虫 (著名写手)
要么回收时多回收几个条带，增加目的片段的量；要么考虑酶切回收后直接进行后续试验

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3楼2015-12-23 10:31:43
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panyax

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 草溪河 at 2015-12-23 10:31:43
要么回收时多回收几个条带，增加目的片段的量；要么考虑酶切回收后直接进行后续试验

这是我酶切之后跑的回收胶电泳图，第一个泳道是maker，2,3,4泳道是同一个样品，我把它们做一管回收的；5，6泳道是一个样品，我也是做一管回收的。这种情况，我是不是只能尝试下酶切胶回收之后，直接连表达载体试试看，因为做了几次都是这种情况
酶切之后跑胶，条带很暗，回收之后就什么都没有了
胶回收.jpg
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4楼2015-12-23 10:52:41
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