| 查看: 1207 | 回复: 2 | |||
[求助]
关于构建基因文库中Sau3AI ， BamHI 均切不动基因组DNA的问题。 已有2人参与
|
|
大家好！ 本人初次在小木虫上发帖，各方面如有不当之处，还望大家包涵。先行谢过了！ 我最近在构建一株细菌的基因组文库，大量抽提了基因组DNA 5次，每次DNA的浓度均在1000-2000ng/ul之间，A260/280都在1.8-2.0之间，A260/230也都大于2.0.跑胶检测，条带很亮，均一，无拖带。 然后，问题来了。用Sau3AI预酶切时，酶切体系是20ul。但是，酶的稀释比例从5-50倍，酶量2ul，时间从15-120min都试过，几乎都切不动，酶是新买的。少有的切动的情况，想再次重复也重复不出来。之后，改用BamHI，50ul体系，3ul的酶，其他是buffer和DNA。酶切时间从8-24h也都切不动。于是，想检测一下基因组DNA有没有什么问题。用基因组DNA作模板，通用引物扩增16S rDNA，都能扩增出来。用DpnI酶切基因组DNA 1h，也切不动。 以上是我遇到的问题，以及尝试解决问题所做的努力。如有叙述不清楚之处，也请见谅！ 恳请有这方面的经验的高手能给我一些指点和建议。将不胜感激！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 functional genomics |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有221人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于DNase1 去除提取的RNA中基因组DNA的问题
已经有12人回复
tmoonday
金虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2999.9
- 散金: 10
- 红花: 2
- 帖子: 290
- 在线: 323小时
- 虫号: 1703018
- 注册: 2012-03-19
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2015-05-08 10:41:36
3楼2015-11-13 21:36:35
10