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panyax

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[求助] 酶切之后跑胶，条带很暗，回收之后就什么都没有了已有2人参与

我的片段大概700bp左右，我连了T载之后，再进行双酶切。酶切之后，进行电泳，条带很暗，切胶回收再跑胶，就没有条带了，请问有什么解决办法啊

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1楼 2015-12-23 10:17:00

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panyax

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 草溪河 at 2015-12-23 10:31:43
要么回收时多回收几个条带，增加目的片段的量；要么考虑酶切回收后直接进行后续试验

这是我酶切之后跑的回收胶电泳图，第一个泳道是maker，2,3,4泳道是同一个样品，我把它们做一管回收的；5，6泳道是一个样品，我也是做一管回收的。这种情况，我是不是只能尝试下酶切胶回收之后，直接连表达载体试试看，因为做了几次都是这种情况

酶切之后跑胶，条带很暗，回收之后就什么都没有了

胶回收.jpg

4楼2015-12-23 10:52:41

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草溪河

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首先回收的条带本身就暗，再者回收过程的损失也是很大的，其次再跑胶不可能把全部回收溶液上样吧，所以最后你胶上的实际DNA样量有多少就可想而知了

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2楼2015-12-23 10:29:56

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草溪河

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要么回收时多回收几个条带，增加目的片段的量；要么考虑酶切回收后直接进行后续试验

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3楼2015-12-23 10:31:43

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panyax

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 草溪河 at 2015-12-23 10:31:43
要么回收时多回收几个条带，增加目的片段的量；要么考虑酶切回收后直接进行后续试验

maker从上往下，依次是1500bp,1000bp，900bp,800bp,700bp,600bp,500bp,400bp,300bp,200bp,100bp

5楼2015-12-23 10:57:31

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