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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR目的条带不亮
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我的雅戈儿

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR目的条带不亮 已有4人参与

我的目的基因1000多bp，PCR做出来有我的目的条带，除了一条载体的剩余片段的条带以外也没有其他的杂带，但是条带就是不亮，再割胶回收都没有什么了，我把循环数从30提升到35，也提高了退火温度，但是就是不亮，所以来请教一下各位
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1楼 2015-10-14 21:00:47
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-10-15 23:26:08
本帖内容被屏蔽
2楼2015-10-15 11:25:44
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tolobio

新虫 (小有名气)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
质粒构建，现在已经比较成熟了。建议送到公司去做比较方便，质量、速度还有保证，价格也不贵。
http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=110
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3楼2015-10-15 12:08:14
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我的雅戈儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Eternity宇 at 2015-10-15 11:25:44
呃，你可以把模板量增加，引物也相应的增加，做个大体系的再做胶回收。
其实也可以不做胶回收直接清洁的…_

模板我增加到2ul,引物还是各1ul，还是不亮，如果不做胶回收的话酶切怕做不好
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4楼2015-10-15 16:16:07
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Aliyo

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
5楼2015-10-15 20:02:15
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我的雅戈儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Aliyo at 2015-10-15 20:02:15
用第一次pcr的产物作为模版重新进行一次pcr试试

试过了，做出来没有条带，只有引物二聚体
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6楼2015-10-16 11:04:11
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hugeneuron

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
模板不用动，引物多一点。你讲微升是没意义的，要看物质的量。

发自小木虫IOS客户端
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7楼2015-10-16 11:07:52
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