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于德斌

金虫 (正式写手)

[交流] 289KD大小蛋白的WB结果分析，求各位帮我分析一下是什么原因 已有4人参与

我做的是mtor蛋白的WB，分子量是289。大家帮我分析一下为什么会出现这样的结果。我是4度湿转过夜的。红色箭头位置应该是目的蛋白位置

289KD大小蛋白的WB结果分析，求各位帮我分析一下是什么原因
mtor.png


289KD大小蛋白的WB结果分析，求各位帮我分析一下是什么原因-1
QQ图片20150711110427.jpg
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知识就是力量
1楼 2015-07-11 11:05:44
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
★
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电泳没做好啊    转膜封闭也有问题
以前做 laminb ，8%浓度分离胶电泳   220v冰中转膜  慢慢找条件试试看
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2楼2015-07-11 15:54:49
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HTweiyi

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这肯定是没做好操作，你确定下需要的胶的浓度是多少，你的蛋白比较大，看需要什么样的浓缩胶和分离胶
还有就是看电泳液的配方是不是有问题，电泳时你的电压是不是很大，可以不要太高
转膜时在冰水里面试试，过夜的话，会不会时间太长了，
WB实验的，很多操作的条件都是需要慢慢摸索的，祝你好运
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3楼2015-07-15 10:05:24
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zwwsoul

铜虫 (小有名气)
爱莫能助啊 师弟
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于德斌
4楼2015-11-17 16:17:07
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于德斌

金虫 (正式写手)
送红花一朵
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4楼: Originally posted by zwwsoul at 2015-11-17 16:17:07
爱莫能助啊 师弟

师姐，这个问题我已经解决啦
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邻家小妹
知识就是力量
5楼2015-11-17 18:06:37
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邻家小妹

新虫 (正式写手)
★
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送红花一朵
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5楼: Originally posted by 于德斌 at 2015-11-17 18:06:37
师姐，这个问题我已经解决啦...

你做大分子很有经验么
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6楼2016-05-27 11:54:42
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邻家小妹

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 于德斌 at 2015-11-17 18:06:37
师姐，这个问题我已经解决啦...

你做大分子很有经验么
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7楼2016-05-27 11:55:18
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于德斌

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 邻家小妹 at 2016-05-27 11:54:42
你做大分子很有经验么...

就做过一次大分子的WB，之前没做出来，我又订了另一个公司的抗体，然后就做出来了。条件跟之前做的都一样。
我个人认为WB做不出来很大程度上取决于抗体
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知识就是力量
8楼2016-05-27 13:29:53
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邻家小妹

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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8楼: Originally posted by 于德斌 at 2016-05-27 13:29:53
就做过一次大分子的WB，之前没做出来，我又订了另一个公司的抗体，然后就做出来了。条件跟之前做的都一样。
我个人认为WB做不出来很大程度上取决于抗体...

我们那个应该不是这个原因，我们的单体是可以做出来的，但是四聚体这种大分子量蛋白我们是非常没有经验 根本拿不到很清晰的条带
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9楼2016-05-28 20:34:20
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