24小时热门版块排行榜    

查看: 5463  |  回复: 17

于德斌

金虫 (正式写手)

[交流] 最近做一个240KD大小蛋白mtor的WB,怎么都不出结果

WB:目的蛋白mtor大小240KD,配胶8%的分离胶。转膜:半干转15V 40min。5%脱脂奶粉封闭过夜。一抗1:400TBST稀释,2h。二抗1:2000TBST稀释,1h。也是用TBST洗膜。结果一直没出。我也试过一抗过夜,也没有出来。maker最上面的条带是250KD。大家有谁做出来的,告诉我一下呗。帮我分析一下原因。谢谢大家!

最近做一个240KD大小蛋白mtor的WB,怎么都不出结果
1.jpg


最近做一个240KD大小蛋白mtor的WB,怎么都不出结果-1
2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

知识就是力量
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

why396198660

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我做了250kD的,有时候能出来有时候出不来。我用的6%的分离胶,然后湿转100mA 1h。据说想这种大分子量的蛋白最好湿转。另外就是蛋白反复冻融的话有可能降解。我都是刚提出的蛋白立刻电泳,然后能做出来。

祝你好运
枯藤老树昏鸦,上班下班回家
17楼2014-10-11 11:27:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

于德斌

金虫 (正式写手)

补充一下,我的一抗是Santa公司的
知识就是力量
2楼2014-09-15 14:22:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

华农夏田

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
40分钟?胶上250KD还很亮嘛。
要科研也要生活
3楼2014-09-15 20:28:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sun_in_night

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你上面的蛋白都没转上去,这么亮。。。试试4度,过夜转,20v
4楼2014-09-15 23:21:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhongzhenlu

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
Santa 抗体?提高抗体浓度……
一树猫咪
5楼2014-09-16 00:10:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anlong138

金虫 (文坛精英)

~~~~~~~~~~~
6楼2014-09-16 00:39:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goldxmc

金虫 (文坛精英)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
~~~~~~~~~~~帮顶
亚达西
7楼2014-09-16 01:02:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)

帮顶 ~~~~~~~~~~~~~
自强不息,厚德载物;独立精神,自由思想。
8楼2014-09-16 06:21:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

于德斌

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sun_in_night at 2014-09-15 23:21:26
你上面的蛋白都没转上去,这么亮。。。试试4度,过夜转,20v

我这用的是伯乐的半干转转膜仪器,能4度吗
知识就是力量
9楼2014-09-16 08:30:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

于德斌

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhongzhenlu at 2014-09-16 00:10:48
Santa 抗体?提高抗体浓度……

抗体浓度已经1:400了,说明书上起始浓度要求是1:200
知识就是力量
10楼2014-09-16 08:30:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 于德斌 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 9/450 2026-08-21 15:38 by dcqxinyang
[基金申请] 人气不行了 +7 fansofjerry 2026-08-21 7/350 2026-08-21 14:13 by Vivilian
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 18/900 2026-08-21 13:46 by 医学老男孩
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 7/350 2026-08-21 12:15 by weiyin
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 18/900 2026-08-21 11:53 by wuchongjun
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
请填处理意见