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于德斌

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 华农夏田 at 2014-09-15 20:28:44
40分钟?胶上250KD还很亮嘛。

就是说没转上呗,再延长转膜时间应该可以吧
知识就是力量
11楼2014-09-16 08:32:00
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gao809

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以降低胶浓度,应该先把你的目的蛋白让它处于胶的中间部分。
Marker里面就几个蛋白,很容易跑下来的,而你的样品中目的蛋白只是很小的一部分,250KDa那么大,很容易堵在上面,不便跑下来,充分分离。
12楼2014-09-16 10:11:14
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sun_in_night

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 于德斌 at 2014-09-15 12:30:16
我这用的是伯乐的半干转转膜仪器,能4度吗...

有什么不可以的。。。
13楼2014-09-16 10:39:45
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个蛋白我做过,不过我用的是湿转,如果半干转的话15V转40min时间有点短了,70min差不多,
你压不出来的主要原因可能是抗体,我们用的是CST的,没有问题
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
14楼2014-09-16 11:25:04
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zhongzhenlu

木虫 (正式写手)


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引用回帖:
10楼: Originally posted by 于德斌 at 2014-09-16 08:30:48
抗体浓度已经1:400了,说明书上起始浓度要求是1:200...

那就1:100试下吧……
一树猫咪
15楼2014-09-16 12:36:32
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laikete

银虫 (小有名气)


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换抗体吧,santa的不行
如果梦的尽头有美丽的期待
16楼2014-09-17 09:24:00
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why396198660

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我做了250kD的,有时候能出来有时候出不来。我用的6%的分离胶,然后湿转100mA 1h。据说想这种大分子量的蛋白最好湿转。另外就是蛋白反复冻融的话有可能降解。我都是刚提出的蛋白立刻电泳,然后能做出来。

祝你好运
枯藤老树昏鸦,上班下班回家
17楼2014-10-11 11:27:59
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needle_ld

至尊木虫 (正式写手)

木虫学者


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Santa antibody is not reliable.
cell signaling will be fine.
cell signaling has a sampler kit, including mTOR, p-mTOR(2448), p-mTOR(2481), G-betaL, Raptor, Rictor. all antibodies work well.
平等观诸法,悲心救世间。解彼真实性,得佛智慧光。
18楼2014-10-31 06:04:22
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