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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 最近做一个240KD大小蛋白mtor的WB，怎么都不出结果
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于德斌

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 华农夏田 at 2014-09-15 20:28:44
40分钟？胶上250KD还很亮嘛。

就是说没转上呗，再延长转膜时间应该可以吧
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知识就是力量
11楼2014-09-16 08:32:00
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gao809

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以降低胶浓度，应该先把你的目的蛋白让它处于胶的中间部分。
Marker里面就几个蛋白，很容易跑下来的，而你的样品中目的蛋白只是很小的一部分，250KDa那么大，很容易堵在上面，不便跑下来，充分分离。
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12楼2014-09-16 10:11:14
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sun_in_night

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 于德斌 at 2014-09-15 12:30:16
我这用的是伯乐的半干转转膜仪器，能4度吗...

有什么不可以的。。。
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13楼2014-09-16 10:39:45
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
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这个蛋白我做过，不过我用的是湿转，如果半干转的话15V转40min时间有点短了，70min差不多，
你压不出来的主要原因可能是抗体，我们用的是CST的，没有问题
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
14楼2014-09-16 11:25:04
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zhongzhenlu

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
10楼: Originally posted by 于德斌 at 2014-09-16 08:30:48
抗体浓度已经1:400了，说明书上起始浓度要求是1:200...

那就1:100试下吧……
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一树猫咪
15楼2014-09-16 12:36:32
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laikete

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换抗体吧，santa的不行
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如果梦的尽头有美丽的期待
16楼2014-09-17 09:24:00
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why396198660

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我做了250kD的，有时候能出来有时候出不来。我用的6%的分离胶，然后湿转100mA 1h。据说想这种大分子量的蛋白最好湿转。另外就是蛋白反复冻融的话有可能降解。我都是刚提出的蛋白立刻电泳，然后能做出来。

祝你好运
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枯藤老树昏鸦，上班下班回家
17楼2014-10-11 11:27:59
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needle_ld

至尊木虫 (正式写手)

木虫学者
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Santa antibody is not reliable.
cell signaling will be fine.
cell signaling has a sampler kit, including mTOR, p-mTOR(2448), p-mTOR(2481), G-betaL, Raptor, Rictor. all antibodies work well.
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平等观诸法，悲心救世间。解彼真实性，得佛智慧光。
18楼2014-10-31 06:04:22
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