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于德斌

金虫 (正式写手)

[交流] 最近做一个240KD大小蛋白mtor的WB,怎么都不出结果

WB:目的蛋白mtor大小240KD,配胶8%的分离胶。转膜:半干转15V 40min。5%脱脂奶粉封闭过夜。一抗1:400TBST稀释,2h。二抗1:2000TBST稀释,1h。也是用TBST洗膜。结果一直没出。我也试过一抗过夜,也没有出来。maker最上面的条带是250KD。大家有谁做出来的,告诉我一下呗。帮我分析一下原因。谢谢大家!

最近做一个240KD大小蛋白mtor的WB,怎么都不出结果
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最近做一个240KD大小蛋白mtor的WB,怎么都不出结果-1
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知识就是力量
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个蛋白我做过,不过我用的是湿转,如果半干转的话15V转40min时间有点短了,70min差不多,
你压不出来的主要原因可能是抗体,我们用的是CST的,没有问题
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
14楼2014-09-16 11:25:04
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于德斌

金虫 (正式写手)

补充一下,我的一抗是Santa公司的
知识就是力量
2楼2014-09-15 14:22:35
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华农夏田

铁虫 (正式写手)


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40分钟?胶上250KD还很亮嘛。
要科研也要生活
3楼2014-09-15 20:28:44
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sun_in_night

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你上面的蛋白都没转上去,这么亮。。。试试4度,过夜转,20v
4楼2014-09-15 23:21:26
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