24小时热门版块排行榜    

查看: 5073  |  回复: 17

于德斌

金虫 (正式写手)

[交流] 最近做一个240KD大小蛋白mtor的WB,怎么都不出结果

WB:目的蛋白mtor大小240KD,配胶8%的分离胶。转膜:半干转15V 40min。5%脱脂奶粉封闭过夜。一抗1:400TBST稀释,2h。二抗1:2000TBST稀释,1h。也是用TBST洗膜。结果一直没出。我也试过一抗过夜,也没有出来。maker最上面的条带是250KD。大家有谁做出来的,告诉我一下呗。帮我分析一下原因。谢谢大家!

最近做一个240KD大小蛋白mtor的WB,怎么都不出结果
1.jpg


最近做一个240KD大小蛋白mtor的WB,怎么都不出结果-1
2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

知识就是力量
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

why396198660

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我做了250kD的,有时候能出来有时候出不来。我用的6%的分离胶,然后湿转100mA 1h。据说想这种大分子量的蛋白最好湿转。另外就是蛋白反复冻融的话有可能降解。我都是刚提出的蛋白立刻电泳,然后能做出来。

祝你好运
枯藤老树昏鸦,上班下班回家
17楼2014-10-11 11:27:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

于德斌

金虫 (正式写手)

补充一下,我的一抗是Santa公司的
知识就是力量
2楼2014-09-15 14:22:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

华农夏田

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
40分钟?胶上250KD还很亮嘛。
要科研也要生活
3楼2014-09-15 20:28:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sun_in_night

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你上面的蛋白都没转上去,这么亮。。。试试4度,过夜转,20v
4楼2014-09-15 23:21:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhongzhenlu

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
Santa 抗体?提高抗体浓度……
一树猫咪
5楼2014-09-16 00:10:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anlong138

金虫 (文坛精英)

~~~~~~~~~~~
6楼2014-09-16 00:39:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goldxmc

金虫 (文坛精英)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
~~~~~~~~~~~帮顶
亚达西
7楼2014-09-16 01:02:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)

帮顶 ~~~~~~~~~~~~~
自强不息,厚德载物;独立精神,自由思想。
8楼2014-09-16 06:21:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

于德斌

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sun_in_night at 2014-09-15 23:21:26
你上面的蛋白都没转上去,这么亮。。。试试4度,过夜转,20v

我这用的是伯乐的半干转转膜仪器,能4度吗
知识就是力量
9楼2014-09-16 08:30:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

于德斌

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhongzhenlu at 2014-09-16 00:10:48
Santa 抗体?提高抗体浓度……

抗体浓度已经1:400了,说明书上起始浓度要求是1:200
知识就是力量
10楼2014-09-16 08:30:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 于德斌 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工 +5 安全上岸! 2026-03-16 5/250 2026-03-18 15:33 by cmz0325
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 9/450 2026-03-18 15:05 by stone_128
[考研] 一志愿西南交大,求调剂 +4 材化逐梦人 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:22 by 007_lilei
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[考研] 302求调剂 +9 负心者当诛 2026-03-11 9/450 2026-03-17 17:13 by ruiyingmiao
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +6 SUICHILD 2026-03-12 6/300 2026-03-17 09:24 by 雾散后相遇lc
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 283求调剂 +10 小楼。 2026-03-12 14/700 2026-03-16 16:08 by 13811244083
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化,一志愿:哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 复试调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见