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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 最近做一个240KD大小蛋白mtor的WB，怎么都不出结果
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于德斌

金虫 (正式写手)

[交流] 最近做一个240KD大小蛋白mtor的WB，怎么都不出结果

WB：目的蛋白mtor大小240KD，配胶8%的分离胶。转膜：半干转15V 40min。5%脱脂奶粉封闭过夜。一抗1:400TBST稀释，2h。二抗1:2000TBST稀释，1h。也是用TBST洗膜。结果一直没出。我也试过一抗过夜，也没有出来。maker最上面的条带是250KD。大家有谁做出来的，告诉我一下呗。帮我分析一下原因。谢谢大家！

最近做一个240KD大小蛋白mtor的WB，怎么都不出结果
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最近做一个240KD大小蛋白mtor的WB，怎么都不出结果-1
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知识就是力量
1楼 2014-09-15 14:21:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

why396198660

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我做了250kD的，有时候能出来有时候出不来。我用的6%的分离胶，然后湿转100mA 1h。据说想这种大分子量的蛋白最好湿转。另外就是蛋白反复冻融的话有可能降解。我都是刚提出的蛋白立刻电泳，然后能做出来。

祝你好运
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枯藤老树昏鸦，上班下班回家
17楼2014-10-11 11:27:59
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普通回帖

于德斌

金虫 (正式写手)
补充一下，我的一抗是Santa公司的
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知识就是力量
2楼2014-09-15 14:22:35
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华农夏田

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
40分钟？胶上250KD还很亮嘛。
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要科研也要生活
3楼2014-09-15 20:28:44
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sun_in_night

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你上面的蛋白都没转上去，这么亮。。。试试4度，过夜转，20v
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4楼2014-09-15 23:21:26
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zhongzhenlu

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Santa 抗体？提高抗体浓度……
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一树猫咪
5楼2014-09-16 00:10:48
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anlong138

金虫 (文坛精英)
~~~~~~~~~~~
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6楼2014-09-16 00:39:07
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goldxmc

金虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
~~~~~~~~~~~帮顶
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亚达西
7楼2014-09-16 01:02:34
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阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)
帮顶 ~~~~~~~~~~~~~
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自强不息，厚德载物；独立精神，自由思想。
8楼2014-09-16 06:21:43
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于德斌

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sun_in_night at 2014-09-15 23:21:26
你上面的蛋白都没转上去，这么亮。。。试试4度，过夜转，20v

我这用的是伯乐的半干转转膜仪器，能4度吗
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知识就是力量
9楼2014-09-16 08:30:16
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于德斌

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhongzhenlu at 2014-09-16 00:10:48
Santa 抗体？提高抗体浓度……

抗体浓度已经1:400了，说明书上起始浓度要求是1:200
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知识就是力量
10楼2014-09-16 08:30:48
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