应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组DNA中关于载体去磷酸化的问题，
31/1返回列表
查看: 2182  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

白色蜻蜓飞

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组DNA中关于载体去磷酸化的问题， 已有2人参与

实验一直卡在连接的问题上，选用的载体为老师以前自己构建的，所以每次载体双酶切后要去磷酸化，用的是takera的CIAP，按照步骤写的是爽酶切后加入去磷酸化体系，温育30min后加入终止液，然后在加热终止后切胶回收，可是胶片图中双酶切都是正常的条带也在，但是在加入CIAP后跑的胶线性化的载体就不见了。求助各位大神在载体去磷酸化的时候都是怎么做的。。

重组DNA中关于载体去磷酸化的问题，
双酶切1`W.png


重组DNA中关于载体去磷酸化的问题，-1
去磷酸化.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-07-10 17:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-07-10 21:04:59
我们一般单酶切，胶回收，然后再去磷酸化，直接纯化，就可以连接了。你的图没条带了，可能是胶回收的问题，不是去磷酸化的问题 。还有双酶切为什么还要去磷酸化那？应该是目的片段单酶切，在去磷酸化吧。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-07-10 17:27:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ppppppppp

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
双酶切去磷酸化，可能是为了防止酶切不完全产生的单酶切片段而设计的。

让你老师换几个酶吧，感觉这两个酶效果不好。要么是你质粒提取有问题，要么是你酶切时候星号活性太大。
赞一下 回复此楼
初来乍到，请多指教
3楼2015-07-10 23:29:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 白色蜻蜓飞 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭