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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于去磷酸化
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weiminhb

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于去磷酸化 已有5人参与

有人用过takara的CIAP吗？我最近做去磷酸化，用这种酶。之后的纯化回收没有用酚氯仿抽提，而是直接用乙醇沉淀回收的。这样可以使CIAP失活吗，能有效地回收吗，对后面操作有没有影响？望高人指点
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1楼 2010-08-17 09:44:06
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j2

木虫 (正式写手)
★ ★
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看天(金币+1):鼓励回答 2010-08-17 13:29:23
应该没问题吧，就算酶没完全去除，缓冲液的盐离子也去除了，没有酶表现活性的环境了
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
2楼2010-08-17 12:57:35
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
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去磷酸化完了之后直接用凝胶回收试剂盒进行回收，不需要割胶回收，直接在酶切体系里面加回收试剂就可以！
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2010-08-18 12:17:29
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weiminhb

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2010-08-18 12:17:29:
去磷酸化完了之后直接用凝胶回收试剂盒进行回收，不需要割胶回收，直接在酶切体系里面加回收试剂就可以！

这样做的话终浓度就会很低，试剂盒回收损失很大的
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4楼2010-08-31 09:17:29
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linysm

银虫 (小有名气)
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[quote]Originally posted by weiminhb at 2010-08-31 09:17:29:

这样做的话终浓度就会很低，试剂盒回收损失很大的 [/quot
那你先灭活再乙醇沉淀吧。
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5楼2010-08-31 09:28:31
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by weiminhb at 2010-08-17 09:44:06:
有人用过takara的CIAP吗？我最近做去磷酸化，用这种酶。之后的纯化回收没有用酚氯仿抽提，而是直接用乙醇沉淀回收的。这样可以使CIAP失活吗，能有效地回收吗，对后面操作有没有影响？望高人指点

直接乙醇沉淀就可以，我做过。但是就是CIAP的作用时间要摸一下。
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52187644
6楼2010-08-31 15:08:00
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weiminhb

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-08-31 15:08:00:



直接乙醇沉淀就可以，我做过。但是就是CIAP的作用时间要摸一下。

那一般要反应多久呢，我一般是4-5小时，但是好像还是不够
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7楼2010-09-01 16:42:13
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我一般都是2小时，有的时候需要更长时间。但是CIAP一定要保证足够活性，否则你延长反应时间效果也不理想的。
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52187644
8楼2010-09-01 17:05:44
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