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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 保存的菌种可以直接摇菌提质粒吗
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cherry--

金虫 (小有名气)

[求助] 保存的菌种可以直接摇菌提质粒吗 已有9人参与

-20保存的菌种（18t载构建的克隆菌）可以直接取10微升到1000LB液体培养基中摇菌提取质粒吗？还是得复摇一下再提？每次提质粒的浓度都不高不知道什么原因。
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1楼 2015-07-09 13:42:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最好先要激活一下，然后再大规模摇菌。
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123456
3楼2015-07-09 17:18:37
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易水秋寒

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cherry--: 金币+1, ★有帮助 2015-07-10 15:47:42
最好是先活化一下，菌液划线取单菌落再扩大，或是直接小量活化后再扩大，如果OD值不高，可以提高接种量。长期冻融的菌保大量培养OD上不去的。
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7楼2015-07-10 09:20:16
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Look_2014

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最好先划个线激活一下，然后挑单克隆去摇菌，

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Look
5楼2015-07-10 08:29:12
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KKHYYc

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按常规的来说是可以直接摇的，但是如果这样有问题的话也可以尝试先激活一下，或者先小摇然后在转大摇。提的质粒浓度跟你菌液浓度，你提取的操作，还有质粒是否是高拷贝的都有关系的。
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9楼2015-07-10 09:52:03
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普通回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cherry--: 金币+2, ★有帮助, 可是质粒浓度不高 2015-07-09 17:07:48
保存的菌种可以直接摇菌提质粒的，放心吧。
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2楼2015-07-09 16:37:57
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erland21411

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cherry--: 金币+2, ★有帮助 2015-07-10 08:54:38
直接摇提质粒可以的。
质粒浓度和你的菌的浓度以及你集菌的多少有关。如果你是用试剂盒提的话，还和你最后一步洗脱液的多少有关系，当然和你用的试剂盒的效率也有关。
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4楼2015-07-09 21:24:14
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cherry--

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by erland21411 at 2015-07-09 21:24:14
直接摇提质粒可以的。
质粒浓度和你的菌的浓度以及你集菌的多少有关。如果你是用试剂盒提的话，还和你最后一步洗脱液的多少有关系，当然和你用的试剂盒的效率也有关。

1ml菌液每次测OD值都不高，0.1~0.2左右，我就怀疑菌有问题，我们用宝生物的质粒小提每次4ml菌液来提质粒，提后用50洗脱，浓度都不高。
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6楼2015-07-10 08:56:23
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Ailly950

新虫 (小有名气)
做过一下这方面的工作…可以的，加油…

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8楼2015-07-10 09:42:21
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仁者努力

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最好还是将菌活化一下，在摇菌提质粒。
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加油
10楼2015-07-10 13:50:49
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