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bw2318

木虫 (小有名气)

[交流] 有测过蛋白质水解度的吗? 有点问题 求指教.

如题,我用过甲醛滴定法和茚三酮比色法两种方法测蛋白质水解度,但遇到些问题,不知道各位有没有跟我一样的困惑,如知道的 请给点建议好吗?
甲醛滴定法:
(1)40%中性甲醛配置:以百里酚酞做指示剂,用氢氧化钠溶液将40%甲醛中和至淡蓝色(食品分析,张永华,王永华)
  问题:中性甲醛滴定到淡蓝色 用的氢氧化钠浓度问题,0.01和1mol/l我都用过,0.01mol/L滴定时达不到淡蓝色要求(需要量很大),1mol/L能滴定至淡蓝色,但对最后样品滴定是影响很大,没滴定就成深蓝色了。

茚三酮比色法:
(1)标准曲线问题:按方法做后发现颜色太深 测不出吸光值。
(2)样品稀释问题:液体样品一般如何预处理后进行测定,避免色泽太深无法测。

具体方法如图:

有测过蛋白质水解度的吗?  有点问题 求指教.
IMG_20150624_111827.jpg


有测过蛋白质水解度的吗?  有点问题 求指教.-1
IMG_20150624_111849.jpg
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bw2318

木虫 (小有名气)

第一个甲醛滴定,第二个图是茚三酮比色法
2楼2015-06-24 11:23:06
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亲亲鸡腿

木虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我做过茚三酮比色法的,但我的标准品颜色梯度挺明显,你用的是什么氨基酸?浓度会不会太高?我最大才200.
努力成为正能量的小太阳
3楼2015-06-24 17:54:50
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bw2318

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 亲亲鸡腿 at 2015-06-24 17:54:50
我做过茚三酮比色法的,但我的标准品颜色梯度挺明显,你用的是什么氨基酸?浓度会不会太高?我最大才200.

标品是谷氨酸,配成200ug/mL标准溶液。

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-06-24 18:50:35
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亲亲鸡腿

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
bw2318: 金币+2 2015-06-29 11:30:12
引用回帖:
4楼: Originally posted by bw2318 at 2015-06-24 18:50:35
标品是谷氨酸,配成200ug/mL标准溶液。
...

哦,我用的是甘氨酸,但是你那步骤上为什么没加抗坏血酸呢?
我说的是你配成梯度时的浓度感觉比我的高。如果只是单纯的浓度高可以再稀释后测,如果是步骤有问题你还要逐一排查了,good luck!
努力成为正能量的小太阳
5楼2015-06-25 07:15:07
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huhyyong

木虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你可以取1-5ml水解液,溶于20ml水中再用甲醛或者茚三酮测定,在线监测的话pH-State法不错,还能维持水解液的pH值
6楼2015-06-29 10:39:36
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bw2318

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by huhyyong at 2015-06-29 10:39:36
你可以取1-5ml水解液,溶于20ml水中再用甲醛或者茚三酮测定,在线监测的话pH-State法不错,还能维持水解液的pH值

谢谢你的回复,主要问题就是甲醛滴定法和电位滴定法都用到中性甲醛,你是如何配置的?

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-06-29 10:45:43
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huhyyong

木虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by bw2318 at 2015-06-29 10:45:43
谢谢你的回复,主要问题就是甲醛滴定法和电位滴定法都用到中性甲醛,你是如何配置的?
...

我基本就用低浓度NaOH条件pH值到6.82
8楼2015-06-29 10:49:04
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huhyyong

木虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by huhyyong at 2015-06-29 10:49:04
我基本就用低浓度NaOH条件pH值到6.82...

滴定的时候也滴定到这个值,好像是8.2,
9楼2015-06-29 10:52:48
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bw2318

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by huhyyong at 2015-06-29 10:52:48
滴定的时候也滴定到这个值,好像是8.2,...

配中性甲醛时,用指示剂了吗?用ph计调节到8.2,有2个浓度氢氧化钠,0.05,0.1。你用的是哪种?

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2015-06-29 11:00:05
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