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bw2318

木虫 (小有名气)

[交流] 有测过蛋白质水解度的吗? 有点问题 求指教.

如题,我用过甲醛滴定法和茚三酮比色法两种方法测蛋白质水解度,但遇到些问题,不知道各位有没有跟我一样的困惑,如知道的 请给点建议好吗?
甲醛滴定法:
(1)40%中性甲醛配置:以百里酚酞做指示剂,用氢氧化钠溶液将40%甲醛中和至淡蓝色(食品分析,张永华,王永华)
  问题:中性甲醛滴定到淡蓝色 用的氢氧化钠浓度问题,0.01和1mol/l我都用过,0.01mol/L滴定时达不到淡蓝色要求(需要量很大),1mol/L能滴定至淡蓝色,但对最后样品滴定是影响很大,没滴定就成深蓝色了。

茚三酮比色法:
(1)标准曲线问题:按方法做后发现颜色太深 测不出吸光值。
(2)样品稀释问题:液体样品一般如何预处理后进行测定,避免色泽太深无法测。

具体方法如图:

有测过蛋白质水解度的吗?  有点问题 求指教.
IMG_20150624_111827.jpg


有测过蛋白质水解度的吗?  有点问题 求指教.-1
IMG_20150624_111849.jpg
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huhyyong

木虫 (小有名气)


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你可以取1-5ml水解液,溶于20ml水中再用甲醛或者茚三酮测定,在线监测的话pH-State法不错,还能维持水解液的pH值
6楼2015-06-29 10:39:36
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huhyyong

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7楼: Originally posted by bw2318 at 2015-06-29 10:45:43
谢谢你的回复,主要问题就是甲醛滴定法和电位滴定法都用到中性甲醛,你是如何配置的?
...

我基本就用低浓度NaOH条件pH值到6.82
8楼2015-06-29 10:49:04
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huhyyong

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8楼: Originally posted by huhyyong at 2015-06-29 10:49:04
我基本就用低浓度NaOH条件pH值到6.82...

滴定的时候也滴定到这个值,好像是8.2,
9楼2015-06-29 10:52:48
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huhyyong

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10楼: Originally posted by bw2318 at 2015-06-29 11:00:05
配中性甲醛时,用指示剂了吗?用ph计调节到8.2,有2个浓度氢氧化钠,0.05,0.1。你用的是哪种?
...

0.05够了,应该,你也没必要一定按照书上的,自己标定一个浓度,使在滴定时候用量在20ml左右,调节pH用的浓度的话,只要能保证误差小就可以了
11楼2015-06-29 11:21:32
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huhyyong

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bw2318: 金币+5 2015-06-29 11:24:56
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10楼: Originally posted by bw2318 at 2015-06-29 11:00:05
配中性甲醛时,用指示剂了吗?用ph计调节到8.2,有2个浓度氢氧化钠,0.05,0.1。你用的是哪种?
...

指示剂和pH计其实是一样的,中性甲醛你查查pH应该6.82,8.2好像是我用PH-state时候的值,太久没做这个,混掉了
12楼2015-06-29 11:23:55
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huhyyong

木虫 (小有名气)


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13楼: Originally posted by bw2318 at 2015-06-29 11:29:28
PH 是8.2。  用百里酚酞做指示剂调了很多次中性甲醛,滴定至淡蓝色就行,,但最终样品滴定时 加入中性甲醛就变成深蓝色了。所以这方法我一直很质疑。  用电位滴定可能会比较好些,我试过这个,书上的方法用的是20% ...

用40%的中性甲醛,中性甲醛加入时候ph会让溶液ph降低的,20-40%甲醛用量你只要保证你甲醛有过量就行了,一般40%更保险而已
16楼2015-06-29 14:17:03
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