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邓楠

铁虫 (小有名气)

[求助] 测蛋白质浓度-样品含有4%SDS-25mM DTT

我的蛋白质样品含有4%SDS和25mM DTT,想测蛋白质浓度,但是 BCA方法要求 SDS ﹤5%,DTT﹤ 1mM;Brandford方法要求  DTT﹤ 5mM,SDS﹤0.01%,不知道还有没有其他方法可以容忍这些或者能够高回收率的去除SDS,从而测得蛋白质的浓度呢?谢谢...
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ctt1984

木虫 (正式写手)

初学者

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励回答 2012-05-16 18:16:12
邓楠: 金币+1, 有帮助 2012-05-16 22:54:29
直接将蛋白装入到透析袋子或者商品化透析架子,在PBS或者对应的缓冲液中透析去掉DTT和SDS.
之后测定蛋白浓度
好好做事,踏实做人!
6楼2012-05-16 10:27:24
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peopole

银虫 (小有名气)

你的蛋白浓度是多少,可以做梯度稀释吗?
2楼2012-05-16 09:54:17
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邓楠

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by peopole at 2012-05-16 09:54:17:
你的蛋白浓度是多少,可以做梯度稀释吗?

我就是想测该蛋白的浓度....目前没法用BCA和Brandford方法测
3楼2012-05-16 10:07:30
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peopole

银虫 (小有名气)

★ ★
看天: 金币+2, 鼓励回答 2012-05-16 18:16:24
额~~不好意思我是想说你稀释了到BCA或者Brandford条件下做试试看
4楼2012-05-16 10:17:45
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邓楠

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by peopole at 2012-05-16 10:17:45:
额~~不好意思我是想说你稀释了到BCA或者Brandford条件下做试试看

如果用BCA方法测,要稀释约25倍,branford测,要稀释50倍,我其实完全不知道浓度有多大,稀释后,会不会低于检测限了。
5楼2012-05-16 10:20:44
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peopole

银虫 (小有名气)

样品就只有这一个吗?不能试试看?BCA和branford灵敏度好像都是ug级,大概估计一蛋白总量,应该没问题的
7楼2012-05-16 10:34:03
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邓楠

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ctt1984 at 2012-05-16 10:27:24:
直接将蛋白装入到透析袋子或者商品化透析架子,在PBS或者对应的缓冲液中透析去掉DTT和SDS.
之后测定蛋白浓度

这种方法,回收率高吗?我的样品大概500uL。。。
8楼2012-05-16 11:12:25
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ctt1984

木虫 (正式写手)

初学者

引用回帖:
8楼: Originally posted by 邓楠 at 2012-05-16 11:12:25:
这种方法,回收率高吗?我的样品大概500uL。。。

样品量怎么这么少?
放心好了,这不是回收,这是透析,你所有的样品理论上都在。
好好做事,踏实做人!
9楼2012-05-16 12:16:36
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邓楠

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by ctt1984 at 2012-05-16 12:16:36:
样品量怎么这么少?
放心好了,这不是回收,这是透析,你所有的样品理论上都在。

你有试过吗?损失大不大?
10楼2012-05-16 13:32:06
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