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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 测蛋白质浓度-样品含有4%SDS-25mM DTT
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邓楠

铁虫 (小有名气)

[求助] 测蛋白质浓度-样品含有4%SDS-25mM DTT

我的蛋白质样品含有4%SDS和25mM DTT，想测蛋白质浓度，但是 BCA方法要求 SDS ﹤5%，DTT﹤ 1mM；Brandford方法要求  DTT﹤ 5mM，SDS﹤0.01%，不知道还有没有其他方法可以容忍这些或者能够高回收率的去除SDS，从而测得蛋白质的浓度呢？谢谢...
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1楼 2012-05-16 09:27:22
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ctt1984

木虫 (正式写手)

初学者

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励回答 2012-05-16 18:16:12
邓楠: 金币+1, ★有帮助 2012-05-16 22:54:29
直接将蛋白装入到透析袋子或者商品化透析架子，在PBS或者对应的缓冲液中透析去掉DTT和SDS.
之后测定蛋白浓度
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好好做事，踏实做人！
6楼2012-05-16 10:27:24
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普通回帖

peopole

银虫 (小有名气)
你的蛋白浓度是多少，可以做梯度稀释吗？
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2楼2012-05-16 09:54:17
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邓楠

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peopole at 2012-05-16 09:54:17:
你的蛋白浓度是多少，可以做梯度稀释吗？

我就是想测该蛋白的浓度....目前没法用BCA和Brandford方法测
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3楼2012-05-16 10:07:30
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peopole

银虫 (小有名气)
★ ★
看天: 金币+2, 鼓励回答 2012-05-16 18:16:24
额~~不好意思我是想说你稀释了到BCA或者Brandford条件下做试试看
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4楼2012-05-16 10:17:45
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邓楠

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by peopole at 2012-05-16 10:17:45:
额~~不好意思我是想说你稀释了到BCA或者Brandford条件下做试试看

如果用BCA方法测，要稀释约25倍，branford测，要稀释50倍，我其实完全不知道浓度有多大，稀释后，会不会低于检测限了。
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5楼2012-05-16 10:20:44
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peopole

银虫 (小有名气)
样品就只有这一个吗？不能试试看？BCA和branford灵敏度好像都是ug级,大概估计一蛋白总量，应该没问题的
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7楼2012-05-16 10:34:03
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邓楠

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ctt1984 at 2012-05-16 10:27:24:
直接将蛋白装入到透析袋子或者商品化透析架子，在PBS或者对应的缓冲液中透析去掉DTT和SDS.
之后测定蛋白浓度

这种方法，回收率高吗？我的样品大概500uL。。。
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8楼2012-05-16 11:12:25
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ctt1984

木虫 (正式写手)

初学者
引用回帖:
8楼: Originally posted by 邓楠 at 2012-05-16 11:12:25:
这种方法，回收率高吗？我的样品大概500uL。。。

样品量怎么这么少？
放心好了，这不是回收，这是透析，你所有的样品理论上都在。
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好好做事，踏实做人！
9楼2012-05-16 12:16:36
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邓楠

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ctt1984 at 2012-05-16 12:16:36:
样品量怎么这么少？
放心好了，这不是回收，这是透析，你所有的样品理论上都在。

你有试过吗？损失大不大？
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10楼2012-05-16 13:32:06
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