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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 【求助】茚三酮法测水解度的相关问题
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zln2008

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】茚三酮法测水解度的相关问题 已有7人参与

我在做蛋白质水解度的测定，用的是茚三酮显色的方法，可是标曲做出来数据就很不平行，而且试剂褪色很快，做标曲的时候，一开始零管就呈粉红色，但是当我把所有的管都测定完后零管已经是透明状了。这样测得数据肯定不准啊，想请教做过这个实验的大侠们，做的时候有没有碰到这种问题，要怎么样防止试剂颜色变化呢？
另外，在放置15分钟后测吸光值之前，试管里的试剂都是分层的，颜色很不均一，但是摇匀后会发生褪色，请问是什么原因呢？
谢谢大家~
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1楼 2010-03-05 14:07:35
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ljf2608

金虫 (正式写手)
★
hawkyin(金币+1):谢谢回贴 2010-04-30 13:56
zln2008(金币+1): 2010-05-05 13:08:55
个人意见：茚三酮配制的时候最好用水溶，不要用乙醇，这样做出的标曲线形很好
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加油！努力！
4楼2010-04-30 11:55:53
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普通回帖

ellen_669

金虫 (初入文坛)
★
hawkyin(金币+1):谢谢回贴 2010-04-30 13:56
我也在做蛋白的降解，但是我用茚三酮比色的时候，刚开始颜色较浅，放置一会颜色就会加深，和你的情况正好相反，而且我有一个问题想请教，我做的标曲总是不能呈线性，想知道你是否也遇到过这个问题，谢谢
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2楼2010-04-26 16:10:52
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迷糊的orange

银虫 (小有名气)
★
hawkyin(金币+1):谢谢回贴 2010-04-30 13:56
zln2008(金币+1): 2010-05-05 13:08:50
加完试剂后要在沸水中加热15 分钟，然后迅速用冷水冷却并不断摇动，使加热时形成的红色被空气氧化退去，呈现蓝紫色时再用60%乙醇定容，摇匀，570nm测吸光值
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3楼2010-04-26 19:26:53
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zln2008

铜虫 (初入文坛)
呵呵，因为老是找不到原因，我就换方法了，用的甲醛法测得。
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5楼2010-05-05 13:07:34
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lyw84102993

铁虫 (初入文坛)
没碰到过这种情况！
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6楼2010-05-05 13:34:09
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玉兰花

银虫 (小有名气)
加入乙醇后应该充分混合均匀，那样子就不会分层了，颜色就均一啦~
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捉摸不透也好~
7楼2010-06-05 09:25:09
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冰雪灵魂

木虫 (著名写手)

食品科学家族族长
★ ★
javeey(金币+2):谢谢给出建议 2010-08-12 12:02:07
引用回帖:
Originally posted by zln2008 at 2010-03-05 14:07:35:
我在做蛋白质水解度的测定，用的是茚三酮显色的方法，可是标曲做出来数据就很不平行，而且试剂褪色很快，做标曲的时候，一开始零管就呈粉红色，但是当我把所有的管都测定完后零管已经是透明状了。这样测得数据肯定 ...

我感觉应该这么做
在空白管中加40%的乙醇时，开始计时，然后间隔相同的时间在以后几个管中加入乙醇，在空白管静止15分钟后开始测吸光度，以后几个管检测间隔时间和加入乙醇间隔时间相同，这样或许可以减小误差....
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要想得到常人所不能得到的，就懂得付出常人所不能付出的！
8楼2010-08-10 19:29:31
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和龟赛跑的人

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
分层没有出现过，但颜色不稳定出现过
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9楼2013-05-09 15:04:00
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她小她

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
标准蛋白中加入一定碱，可以增加稳定性，文献中有改进
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10楼2013-12-03 22:39:05
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