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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白质纯度检测
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zhougama

禁虫 (正式写手)
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1楼 2011-09-20 15:24:22
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

doublehelix

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
zhougama(金币+1):谢谢参与
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-10-14 19:38:09
液相 HPLC 比较客观些
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10楼2011-10-11 15:09:34
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普通回帖

wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
zhougama(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-09-21 10:03:37
液相 HPLC
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2楼2011-09-20 16:17:31
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
zhougama(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-09-21 10:03:54
快速一点的，可以用紫外吸收测定
蛋白质变性后（盐酸胍或脲），测定280nm处吸收，确定浓度！
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3楼2011-09-20 17:10:06
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zlu520

至尊木虫 (职业作家)
★
zhougama(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
1楼: Originally posted by zhougama at 2011-09-20 15:24:22:
相信做蛋白质的一定都会碰到检验自己蛋白质纯度的问题，我一般都是通过SDS-PAGE来检测，但是这个方法却不能做到对蛋白质纯度的量化，不知道除了这个方法之外大家还用过什么样的方法！

可以用柱层析收集蛋白质。。
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4楼2011-09-20 18:40:20
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li1977li

金虫 (小有名气)
★
zhougama(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
1楼: Originally posted by zhougama at 2011-09-20 15:24:22:
相信做蛋白质的一定都会碰到检验自己蛋白质纯度的问题，我一般都是通过SDS-PAGE来检测，但是这个方法却不能做到对蛋白质纯度的量化，不知道除了这个方法之外大家还用过什么样的方法！

质谱分析可以呀！
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5楼2011-09-20 19:05:04
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zhougama

禁虫 (正式写手)
★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-10-14 19:37:59
本帖内容被屏蔽
6楼2011-09-20 20:08:38
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zhougama

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
7楼2011-09-20 20:18:21
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zhangjing202

铁虫 (初入文坛)
★
zhougama(金币+1):谢谢参与
打质谱吧
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8楼2011-10-11 10:49:23
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sspxiaoji

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
zhougama(金币+1):谢谢参与
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-10-14 19:38:05
HPLC
毛细管电泳
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9楼2011-10-11 14:03:24
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gaga123

木虫 (小有名气)
★
zhougama(金币+1):谢谢参与
zhougama(金币+1): 谢谢你的建议，主要是这些方法比较复杂，我个人还是倾向于选择灰度扫描~嘿嘿！ 2011-10-11 18:27:58
液相HPLC啊，可以走SEC或者RP啊，走反相的多吧，C4，C8或者C18
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11楼2011-10-11 16:48:40
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kading

金虫 (正式写手)
★
zhougama(金币+1):谢谢参与
柱层析非常好
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12楼2011-10-11 20:40:07
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暖木warm

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by wlt728 at 2011-09-20 16:17:31:
液相 HPLC

是专门做蛋白的液相吗？还是普通的液相也可以？
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13楼2011-10-11 22:07:10
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zhougama

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
14楼2011-10-12 08:22:04
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chu_81

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
电泳，凝胶成像分析吧！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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15楼2011-10-12 10:37:24
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jianpcai

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
电泳后，通过凝胶成像系统计算一下相对含量。
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16楼2011-10-12 15:42:36
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
13楼: Originally posted by 暖木warm at 2011-10-11 22:07:10:
是专门做蛋白的液相吗？还是普通的液相也可以？

想知道蛋白含量，可以跑电泳，然后用凝胶成像系统，根据你上marker的量来推算出来，或者用lowry法，BCA等等，如果想精确些，最好还是用HPLC，不过前提是你的方法得准确。HPLC分析型的就可以了！我们测蛋白含量一般用的是C18的反相柱子！
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17楼2011-10-13 13:12:40
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小兵pp

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
用液相HPLC，跑反相柱
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18楼2011-10-13 16:43:59
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luoyang87

新虫 (初入文坛)
核酸蛋白检测仪
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19楼2011-10-14 13:41:12
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lpw106

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
sec -hplc 、rp-hplc都可以
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20楼2011-10-14 16:41:40
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lpw106

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
在杂质比较多的时候 测蛋白含量的话  可以用亲和柱跑个标准曲线 再粗略检测含量
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21楼2011-10-14 16:47:15
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clover22

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
20楼: Originally posted by lpw106 at 2011-10-14 16:41:40
sec -hplc 、rp-hplc都可以

如果用RP-HPLC检测有明显杂质峰，而用SEC-HPLc检测不出来，是什么原因呢？
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22楼2013-11-14 14:55:50
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