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bw2318

木虫 (小有名气)

[交流] 有测过蛋白质水解度的吗? 有点问题 求指教.

如题,我用过甲醛滴定法和茚三酮比色法两种方法测蛋白质水解度,但遇到些问题,不知道各位有没有跟我一样的困惑,如知道的 请给点建议好吗?
甲醛滴定法:
(1)40%中性甲醛配置:以百里酚酞做指示剂,用氢氧化钠溶液将40%甲醛中和至淡蓝色(食品分析,张永华,王永华)
  问题:中性甲醛滴定到淡蓝色 用的氢氧化钠浓度问题,0.01和1mol/l我都用过,0.01mol/L滴定时达不到淡蓝色要求(需要量很大),1mol/L能滴定至淡蓝色,但对最后样品滴定是影响很大,没滴定就成深蓝色了。

茚三酮比色法:
(1)标准曲线问题:按方法做后发现颜色太深 测不出吸光值。
(2)样品稀释问题:液体样品一般如何预处理后进行测定,避免色泽太深无法测。

具体方法如图:

有测过蛋白质水解度的吗?  有点问题 求指教.
IMG_20150624_111827.jpg


有测过蛋白质水解度的吗?  有点问题 求指教.-1
IMG_20150624_111849.jpg
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bw2318

木虫 (小有名气)

第一个甲醛滴定,第二个图是茚三酮比色法
2楼2015-06-24 11:23:06
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bw2318

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 亲亲鸡腿 at 2015-06-24 17:54:50
我做过茚三酮比色法的,但我的标准品颜色梯度挺明显,你用的是什么氨基酸?浓度会不会太高?我最大才200.

标品是谷氨酸,配成200ug/mL标准溶液。

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4楼2015-06-24 18:50:35
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bw2318

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by huhyyong at 2015-06-29 10:39:36
你可以取1-5ml水解液,溶于20ml水中再用甲醛或者茚三酮测定,在线监测的话pH-State法不错,还能维持水解液的pH值

谢谢你的回复,主要问题就是甲醛滴定法和电位滴定法都用到中性甲醛,你是如何配置的?

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-06-29 10:45:43
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bw2318

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by huhyyong at 2015-06-29 10:52:48
滴定的时候也滴定到这个值,好像是8.2,...

配中性甲醛时,用指示剂了吗?用ph计调节到8.2,有2个浓度氢氧化钠,0.05,0.1。你用的是哪种?

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2015-06-29 11:00:05
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bw2318

木虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by huhyyong at 2015-06-29 11:23:55
指示剂和pH计其实是一样的,中性甲醛你查查pH应该6.82,8.2好像是我用PH-state时候的值,太久没做这个,混掉了...

PH 是8.2。  用百里酚酞做指示剂调了很多次中性甲醛,滴定至淡蓝色就行,,但最终样品滴定时 加入中性甲醛就变成深蓝色了。所以这方法我一直很质疑。  用电位滴定可能会比较好些,我试过这个,书上的方法用的是20%甲醛,我们平时买的是40%甲醛,之前我用水稀释了做的,不知这样对不对。你用电位滴定时用的20%还是40%的甲醛?
13楼2015-06-29 11:29:28
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bw2318

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 亲亲鸡腿 at 2015-06-25 07:15:07
哦,我用的是甘氨酸,但是你那步骤上为什么没加抗坏血酸呢?
我说的是你配成梯度时的浓度感觉比我的高。如果只是单纯的浓度高可以再稀释后测,如果是步骤有问题你还要逐一排查了,good luck!...

的确是比较高浓度,吸光值都过1了,所以准备稀释再做下试试吧
15楼2015-06-29 11:30:45
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