| 查看: 1223 | 回复: 3 | ||||
[交流]
请教一些关于蛋白纯化的～问题 已有3人参与
|
|
最近本人在延续师姐的菌株做蛋白下游纯化，遇到了一些比较奇怪的问题，新手没什么经验，所以想请教一下大家一些问题 1我的蛋白超声后用1.5ml离心管10000rpm离心10min，上清和沉淀都有蛋白是不是就可以确定一定有包含体也有可溶性表达？有没有可能上清中的蛋白是离心不完全呢？ 2蛋白沉淀用8m尿素还是无法裂解正常么？ 3用蛋白分析软件看我的蛋白疏水氨基酸指数挺高，且分布平均，会不会影响其亲水氨基酸电离导致预测软件对等电点预测与实际等电点不合？ 4实验加入SDS 后完全溶解，老板想让我加入SDS继续做纯化过柱子，请问SDS是不是很难除去？会不会对离子柱纯化效果产生影响？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白表达纯化与检测 |
» 猜你喜欢
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
关于蛋白质纯化的问题
已经有6人回复
- 蛋白纯化问题，希望大家给我支支招，成分感谢
已经有41人回复
- 有关蛋白纯化的问题
已经有11人回复
- his标签纯化的蛋白如何保存
已经有4人回复
- 蛋白表达及纯化
已经有29人回复
- 求镍柱子纯化表达蛋白的具体步骤，注意事项！！！
已经有5人回复
- AKTA蛋白纯化 考染检测无蛋白
已经有4人回复
- 关于Hs tag 蛋白纯化后蛋白不纯的问题
已经有6人回复
- 蛋白质的Ni柱纯化问题
已经有23人回复
- 求助各位大神关于含组氨酸标签蛋白纯化的问题
已经有8人回复
- 关于蛋白质纯化柱子的问题
已经有9人回复
- 关于镍柱纯化蛋白
已经有10人回复
- 纯化出的蛋白没有活性，求教！
已经有14人回复
- 求教离子交换柱纯化蛋白的问题
已经有28人回复
- 蛋白纯化遇到问题
已经有22人回复
- 蛋白互作必会，GST纯化遇到的问题
已经有13人回复
- 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教
已经有18人回复
- 蛋白纯化分离问题
已经有19人回复
- 关于蛋白纯化的问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化中透析的问题！！
已经有9人回复
- 【求助/交流】请教一个his-tag蛋白质纯化问题
已经有9人回复
2楼2015-06-24 08:54:08
恶魔的左眼
木虫 (正式写手)
- 应助: 110 (高中生)
- 金币: 2237.7
- 红花: 20
- 帖子: 425
- 在线: 880.6小时
- 虫号: 3705608
- 注册: 2015-03-03
- 专业: 蛋白质组学
3楼2015-06-24 10:56:00
calorimetry
铜虫 (正式写手)
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 126.8
- 红花: 13
- 帖子: 569
- 在线: 36.5小时
- 虫号: 3901654
- 注册: 2015-06-01
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
1我的蛋白超声后用1.5ml离心管10000rpm离心10min，上清和沉淀都有蛋白是不是就可以确定一定有包含体也有可溶性表达？有没有可能上清中的蛋白是离心不完全呢？ 答：不能。包涵体的形成和溶解都是动态的过程。 2蛋白沉淀用8m尿素还是无法裂解正常么？ 答：很正常呀，因为沉淀颗粒大，变性剂只能够接触到颗粒表面的蛋白质，可以适当把沉淀杂碎些再用变性剂或者表面活性剂。Urea、盐酸胍、表面活性剂可轮换使用，还可以适当加热。楼主说的沉淀因该是包涵体吧。 3用蛋白分析软件看我的蛋白疏水氨基酸指数挺高，且分布平均，会不会影响其亲水氨基酸电离导致预测软件对等电点预测与实际等电点不合？ 答：任何分析预测软件都有局限性，可以多用几种生物信息学软件加以等电点预测。顺便还可以做个蛋白质的空间结构预测。 4实验加入SDS 后完全溶解，老板想让我加入SDS继续做纯化过柱子，请问SDS是不是很难除去？会不会对离子柱纯化效果产生影响？ 答：直接不除去SDS就用离子交换层析柱的效果不好，我们反正从来没有这样用做过，因为会屏蔽蛋白质的原有电荷，每1克蛋白质平均结合1.4克SDS，虽然过柱时SDS也会掉下来，但是肯定不会全部掉下来。 |
4楼2015-06-24 11:32:15
20