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安木木

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取问题已有5人参与

明天师姐让小白提质粒 上一次 在加P1 800微升  P2 800微升 之后木有澄清(师姐说澄清之后再加 P3) 又继续加 最后加到P1 P2 各1800微升还是没有澄清 TAT 如何是好。。 害怕这次又出现这种情况 帮我分析下原因吧 谢谢各位虫虫~~

质粒提取问题
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永恒_99

金虫 (正式写手)

不知是不是菌的量比较多
2楼2015-06-24 10:11:26
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li201018

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-24 22:53:13
有一步是轻微摇晃,一定要轻微缓慢上下颠倒,要不然此步会引起蛋白质污染,导致你后续离心浑浊,轻微摇晃过后可以再冰上放置10min再离心。
低调!务实!
3楼2015-06-24 11:24:09
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-24 22:53:46
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-24 22:54:00
首先你要确定你的方法没错,加P1后要充分重悬,加P2后一定要温和并充分的上下翻转4-6次混合均匀,使菌体充分裂解,直至形成透亮的溶液,然后5分钟之内加P3,这步也需要温和并充分地上下翻转混合6-8次
医学&统计学
4楼2015-06-24 19:26:34
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a1353601094

新虫 (初入文坛)

首先你是做的大抽还是小抽。。你样品多少体系的。正常情况离心后的细胞加P1充分混匀后加P2不会澄清的。。。多多少少有浑浊的
5楼2015-06-24 21:00:27
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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你菌量多少啊?不是有说明书吗?还是自己试剂提的?
努力打败一切
6楼2015-06-25 10:24:48
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表弟爱网游

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
P1只是起一个悬浮菌体的作用,加再多也没太大用。P2是用来裂解的,菌体悬浮液有一点浑浊,加入P2裂解细胞后,溶液会变得澄清,说明裂解比较充分了,这时候加入P3终止裂解反应,得到大量白色沉淀,离心取上清。
当一切如飞舞的落叶坠落,惋惜之余,也要学会原谅与释怀
7楼2015-06-25 12:24:22
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liuyang0801

禁虫 (著名写手)

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本帖内容被屏蔽

8楼2015-06-25 14:37:16
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