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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取问题
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安木木

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取问题 已有5人参与

明天师姐让小白提质粒 上一次 在加P1 800微升  P2 800微升 之后木有澄清（师姐说澄清之后再加 P3） 又继续加 最后加到P1 P2 各1800微升还是没有澄清 TAT 如何是好。。 害怕这次又出现这种情况 帮我分析下原因吧 谢谢各位虫虫~~

质粒提取问题
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1楼 2015-06-23 22:24:42
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永恒_99

金虫 (正式写手)
不知是不是菌的量比较多
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2楼2015-06-24 10:11:26
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li201018

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-24 22:53:13
有一步是轻微摇晃，一定要轻微缓慢上下颠倒，要不然此步会引起蛋白质污染，导致你后续离心浑浊，轻微摇晃过后可以再冰上放置10min再离心。
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低调！务实！
3楼2015-06-24 11:24:09
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-24 22:53:46
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-24 22:54:00
首先你要确定你的方法没错，加P1后要充分重悬，加P2后一定要温和并充分的上下翻转4-6次混合均匀，使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液，然后5分钟之内加P3，这步也需要温和并充分地上下翻转混合6-8次
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医学&统计学
4楼2015-06-24 19:26:34
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a1353601094

新虫 (初入文坛)
首先你是做的大抽还是小抽。。你样品多少体系的。正常情况离心后的细胞加P1充分混匀后加P2不会澄清的。。。多多少少有浑浊的
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5楼2015-06-24 21:00:27
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你菌量多少啊？不是有说明书吗？还是自己试剂提的?
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努力打败一切
6楼2015-06-25 10:24:48
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表弟爱网游

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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P1只是起一个悬浮菌体的作用，加再多也没太大用。P2是用来裂解的，菌体悬浮液有一点浑浊，加入P2裂解细胞后，溶液会变得澄清，说明裂解比较充分了，这时候加入P3终止裂解反应，得到大量白色沉淀，离心取上清。
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当一切如飞舞的落叶坠落，惋惜之余，也要学会原谅与释怀
7楼2015-06-25 12:24:22
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liuyang0801

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
8楼2015-06-25 14:37:16
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