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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 分子新手，PCR产物回收浓度太低，请教各位虫友！
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SDAUWY

新虫 (初入文坛)

[求助] 分子新手，PCR产物回收浓度太低，请教各位虫友！ 已有6人参与

本人刚开始接触分子方面的试验，准备做RNA干扰，目前正用带T7的引物跑PCR，产物带挺亮，然后用天根的试剂盒切胶回收的浓度太低，一般都在30ng/μl左右。我后续要用这个回收产物做模板走promega T7BiboMAX Express RNAi System 这个试剂盒的程序，要求模板量在1 μg，但我的回收产物远不够这个量，请教各位虫友怎么提高回收产物的量，或者有做过这个的我想请教下整个过程，非常感谢！
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1楼 2015-06-17 22:30:30
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表弟爱网游

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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SDAUWY(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:41:31
扩PCR多扩几管，电泳鉴定的时候，跟MARKER比对一下，粗略算下浓度。回收的时候，就按正常的步骤回收，但是最后加水溶解的时候，一定记得水滴在回收柱子的膜上面，一般20ul够了。比如你扩了3份，第一个柱子用20ul溶解后，这20ul再加到第二份的柱子膜上面，再溶一次，然后再溶第三个柱子，浓度会提的很高，灰常亮切记水一定要滴到膜上面，否则回收产物溶不下来。
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当一切如飞舞的落叶坠落，惋惜之余，也要学会原谅与释怀
6楼2015-06-19 11:03:54
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博克侬浮码

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
SDAUWY(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:41:09
多扩几管PCR，在回收过柱子的时候把离心后的液体再过一遍柱子，洗脱时也是，洗脱两次，加的洗脱液量不要太大，我这样做回收的时候浓度在100-300ng/ul左右
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2楼2015-06-18 10:36:19
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doudou_32

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
SDAUWY(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:41:17
如果你跑出来的带是单一一条带，可以试试PCR产物回收试剂盒，回收效率会高一些。
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3楼2015-06-18 11:03:24
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SDAUWY

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 博克侬浮码 at 2015-06-18 10:36:19
多扩几管PCR，在回收过柱子的时候把离心后的液体再过一遍柱子，洗脱时也是，洗脱两次，加的洗脱液量不要太大，我这样做回收的时候浓度在100-300ng/ul左右

谢谢，我再试试，今天刚跑的PCR产物有500-600的浓度，按你的说法做做试试看能回收到多少
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4楼2015-06-18 15:54:09
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