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求解pETDUET-1 原核共表达两个基因一些不懂的地方 已有3人参与
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有两个通过pulldown、酵母双杂验证过的两个互作蛋白，现在想在大肠杆菌中共表达这两个蛋白， 第一个问题：是在一个质粒中表达这两个蛋白好（pETDuet-1），还是分别在两个质粒中表达好(pETDuet-1/pACYCDuet-1)？ 第二个问题：假设在一个pETDuet-1共表达两个基因，而只有一个His标签（载体截图在下面），会不会因为结合力弱而只得到一个蛋白（与His直接相连的蛋白与Ni柱结合）另一个蛋白直接就是穿出，得不到互作蛋白啊？ PS: pulldown可以把这两个蛋白拉出来，那His纯化可以依靠结合力拉出来吗？  图片1.jpg |
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2楼2015-06-17 12:40:55