24小时热门版块排行榜

返回列表

小茶91520

铜虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 95.3
散金: 80
红花: 1
帖子: 73
在线: 108.2小时
虫号: 1468277
注册: 2011-10-30
性别: GG
专业: 微生物遗传育种学

[求助] 各位虫友能帮忙分析下我提取的果实RNA问题可能出在哪吗？已有9人参与

操作步骤
1) 取 800ul 提取缓冲液加入 2ml 离心管中，预热至 65℃
2) 取新鲜样品放入研钵，在液氮中迅速研磨成粉末状。
3) 迅速将 50-100mg 粉末状样品转入预热的提取缓冲液中，涡旋振荡器混匀，65℃水浴 10min，每隔 2min 混匀一次。
4) 水浴结束后，冷却至室温。
5) 向离心管中加入等体积氯仿/异戊醇(24:1)，涡旋振荡器充分混匀，冰浴10min。
6) 离心管在 4℃下 12000×g 离心 10min。
7) 取上清，转入新的 2ml 离心管，重复操作(5)、 (6)。注：如果中间层仍有物质，可以继续重复步骤（ 5）和（ 6），直至中间层较干净为止（但最多抽提 4 次，过柱时抽提 3 次，否组次数太多会降解）。
8) 取上清，转入新的 1.5ml 离心管中，加入 1/3 体积的 8M LiCl，混匀，加入等体积的异丙醇，混匀，放入-20℃冰箱1小时。
9) 4℃， 12000×g 离心 15 min。弃掉上清，注意不要倒出沉淀。
10) 向 RNA 沉淀中加入 1ml 75％乙醇，漩涡振荡器上振荡混匀 5s， 4oC， 7500×g离心 5min，弃上清。
11) 4oC， 7500×g 离心 1min，用枪头小心吸弃多余液体。

提取了很多次，效果都不好！恳请各位帮忙分析一下！图中间是mark，右边是实验提取的RNA。是不是RNA降解的太厉害？还是DNA降解所出现的拖尾现象？

IMG_2443.JPG

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

第一次提RNA,请各位前辈指点！已经有4人回复
提取的RNA电泳后条带已经有6人回复
求助各位大神啊关于植物果实RNA提取过程中碾碎问题已经有4人回复
求问提RNA的样品需要加入Trizol保存吗？已经有5人回复
Trizol 法怎么提取高质量RNA 已经有22人回复
帮忙看一下提的真菌RNA 跑的电泳谢谢啦~~~ 已经有17人回复
总RNA电泳图求分析已经有7人回复
请问在提RNA的时候，用氯仿：异戊醇=24:1，还是用氯仿？已经有8人回复
细胞RNA提取一直失败，什么原因？已经有8人回复
姜的总RNA提取，电泳只有一条带已经有29人回复
Trizol提取的RNA有粘稠，跑胶有amear，怎么处理？已经有8人回复
请大家帮我分析下我提的质粒怎么这么多条带呀? 已经有10人回复
RNA提取电泳效果不好已经有12人回复
有关细胞总RNA提取已经有16人回复
提取的RNA 浓度低还能做电泳检测质量吗？已经有3人回复
Trizol 法 RNA提取失败请虫友帮忙分析下什么原因?该怎么办吖已经有18人回复
RNA电泳图分析已经有10人回复
植物RNA提取电泳图，求解析！已经有3人回复
提取RNA后，反转录后用β-actinpcr很多条带已经有20人回复
提取的rna浓度只有60ng/ul，影响逆转录吗，请好心虫友指点已经有17人回复
植物RNA提取试剂盒已经有9人回复
质粒DNA提取成了这样，请大家帮忙分析一下已经有27人回复

1楼 2015-06-16 17:01:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lichj

铜虫 (初入文坛)

应助: 6 (幼儿园)
金币: 305.5
帖子: 21
在线: 9小时
虫号: 242416
注册: 2006-04-11
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小茶91520: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-06-17 16:36:38

从图上看RNA明显降解了。不知道你的试剂是什么配方，植物中富含多酚和多糖，果实中多糖含量很高，用常用试剂通常效果不好，现在有很多文献，里面是一些改良方法，比如加入PVP除酚类物质，巯基乙醇防止氧化，licl是可以除多糖的，但是它在沉淀RNA的时候是选择性沉淀分子量大的RNA，一些低分子量的可能会丢失，你如果做小RNA，或tRNA类的研究最好不用此方法，可以用终浓度10%的乙醇离心去除多糖。多查查文献吧，我们提这一类的植物RNA都是自己配制的试剂，比试剂盒好一些。