| 查看: 5027 | 回复: 22 | ||||
fuchange918木虫 (正式写手)
|
[求助]
Trizol 法怎么提取高质量RNA 已有5人参与
|
|
本人实验真菌用Trizol法提取RNA后，跑胶验证降解程度还可以忍受，但是污染方面很严重：OD260/280=1.5左右，OD260/230=1.0左右，后期需要做RACE 主要有一下问题： （1）试验中哪些试剂需要预冷（4度还是-20℃），比如氯仿、异丙醇、75%乙醇 （2）每次异丙醇沉淀离心后，管壁上总是粘有和底部沉淀一样的东西，而且沉淀用DEPC处理水溶解时总是不能全部溶解，应该怎么解决？ （3）还有就这这么步骤中的放置时间，帮我看看有没有问题，是过长还是过短 本人RNA提取步骤： 1、细胞或组织加 Trizol 后，室温放置 5min，使其充分裂解。。 2、12,000rpm 离心 10min，弃沉淀。 3、按 200ul 氯仿/ml Trizol 加入氯仿，上下颠倒混匀后冰上放置5min。 4、4℃ 12,000g 离心 15min。 5、吸取上层水相，至另一离心管中 6、按 0.5ml 异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀，冰浴放置10min。 7、4℃ 12,000g 离心 10min，弃上清，RNA 沉于管底。 8、按 1ml 75%乙醇/ml Trizol 加入 75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。 9、 4℃ 8,000g 离心 5min，尽量弃上清。 10、室温晾干或真空干燥 5-10min。注：RNA 样品不要过于干燥，否则很难溶解。 11、可用 30ul DEPC处理水溶解RNA样品 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 生物技术/方法讲解 | 经验方法/使用说明 |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有98人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 为什么trizol法提总RNA，电泳结果只有一条很亮的带
已经有4人回复
- Trizol提取的RNA有粘稠，跑胶有amear，怎么处理？
已经有8人回复
- 用TRIzol提白色念珠菌RNA，发现没法破壁，那么在用TRIzol提之前，该怎么预处理啊，
已经有7人回复
- RNA提取结果，我提了好多次，传说中的高质量没出现
已经有19人回复
- Trizol 法 RNA提取失败 请虫友帮忙分析下 什么原因?该怎么办吖
已经有18人回复
- trizol 提RNA，DNA酶的问题
已经有7人回复
- 提取RNA加Trizol后变质
已经有11人回复
- 提取RNA是直接加Trizol还是胰酶消化后加Trizol？
已经有20人回复
- 分子生物学-RNA提取-采用Trizol 溶液提取细菌总RNA （来自云端实验室）
已经有5人回复
- trizol法手提虾肠道RNA电泳图，求分析
已经有12人回复
- 如何用trizol试剂保存RNA提取材料？请各位前辈指点指点，不甚感激！
已经有14人回复
- TRIZOL法提取NP69细胞的RNA
已经有3人回复
- invitrogen 的RNA提取中文版 trizol 法
已经有235人回复
- Trizol 如何提起细胞培养液中的病毒RNA
已经有8人回复
- RNA 提取的一些问题，请大家帮忙回答
已经有13人回复
- RNA提取TRIZOL法最关键的注意步骤是什么
已经有18人回复
- 【求助/交流】提总的RNA的试剂是RNAiso效果好还是Trizol效果好
已经有31人回复
- 【求助/交流】trizol 提ＲＮＡ中的一些问题
已经有24人回复
a314919473
银虫 (著名写手)
- 应助: 48 (小学生)
- 金币: 981.2
- 散金: 188
- 红花: 10
- 沙发: 17
- 帖子: 1122
- 在线: 89.5小时
- 虫号: 3398651
- 注册: 2014-09-04
- 性别: GG
- 专业: 基因组学
2楼2014-09-05 14:50:54
fuchange918
木虫 (正式写手)
- 应助: 33 (小学生)
- 金币: 2368.4
- 红花: 4
- 帖子: 716
- 在线: 151.7小时
- 虫号: 1727732
- 注册: 2012-03-30
- 性别: GG
- 专业: 食用真菌学
3楼2014-09-05 15:38:53
niil
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 35 (小学生)
- 金币: 6673.5
- 红花: 3
- 帖子: 835
- 在线: 233.2小时
- 虫号: 876426
- 注册: 2009-10-18
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
4楼2014-09-05 15:56:04
a314919473
银虫 (著名写手)
- 应助: 48 (小学生)
- 金币: 981.2
- 散金: 188
- 红花: 10
- 沙发: 17
- 帖子: 1122
- 在线: 89.5小时
- 虫号: 3398651
- 注册: 2014-09-04
- 性别: GG
- 专业: 基因组学
5楼2014-09-05 15:58:24
a314919473
银虫 (著名写手)
- 应助: 48 (小学生)
- 金币: 981.2
- 散金: 188
- 红花: 10
- 沙发: 17
- 帖子: 1122
- 在线: 89.5小时
- 虫号: 3398651
- 注册: 2014-09-04
- 性别: GG
- 专业: 基因组学
6楼2014-09-05 16:01:13
7楼2014-09-05 16:31:39
fuchange918
木虫 (正式写手)
- 应助: 33 (小学生)
- 金币: 2368.4
- 红花: 4
- 帖子: 716
- 在线: 151.7小时
- 虫号: 1727732
- 注册: 2012-03-30
- 性别: GG
- 专业: 食用真菌学
8楼2014-09-05 21:02:53
9楼2014-09-06 04:30:41
fuchange918
木虫 (正式写手)
- 应助: 33 (小学生)
- 金币: 2368.4
- 红花: 4
- 帖子: 716
- 在线: 151.7小时
- 虫号: 1727732
- 注册: 2012-03-30
- 性别: GG
- 专业: 食用真菌学
10楼2014-09-06 08:10:54
