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南邮杨栋梁

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[求助] 用TRIzol提白色念珠菌RNA，发现没法破壁，那么在用TRIzol提之前，该怎么预处理啊，

用TRIzol提白色念珠菌RNA，发现没法破壁，那么在用TRIzol提之前，该怎么预处理啊，（麻烦说详细点，最近老是提不出啊）

PS：之前用EDTA,SDS化学法破壁，甚至用细胞破碎仪也都没有搞定！后面改用TRIzol发现还是没把那破细胞壁啊，

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好好工作

1楼2013-04-04 20:47:58

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yangqi

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我以前提放线菌的RNA的时候，先把洗过的菌丢到液氮里面冻个五分钟左右，再放到研钵里加液氮使劲磨，直到磨成细细的粉末，再加trizol,磨到冻结的trizol化开，破碎效果还可以。
磨的时候一定要用力，很累的。

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人生，只有坚强，才能美好！

2楼2013-04-05 10:25:11

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lcat

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【答案】应助回帖

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南邮杨栋梁: 金币+10 2013-04-05 20:00:08

同意楼上，真菌一般要液氮研磨的。不过我们不同的是，磨成细细的粉末后，是把粉末加到预先加好trizol的小离心管里的，振荡器上剧烈振荡后继续往下做就可以了。
楼主注意研磨前一定要把菌体尽量弄干，不然含水的话一加液氮就成了冰疙瘩，根本磨不动。祝成功！

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3楼2013-04-05 13:19:10

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南邮杨栋梁

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引用回帖:

3楼: Originally posted by lcat at 2013-04-05 13:19:10
同意楼上，真菌一般要液氮研磨的。不过我们不同的是，磨成细细的粉末后，是把粉末加到预先加好trizol的小离心管里的，振荡器上剧烈振荡后继续往下做就可以了。
楼主注意研磨前一定要把菌体尽量弄干，不然含水的话一 ...

后天去试一下

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好好工作

4楼2013-04-05 20:00:46

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