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南邮杨栋梁

银虫 (小有名气)

[求助] 用TRIzol提白色念珠菌RNA,发现没法破壁,那么在用TRIzol提之前,该怎么预处理啊,

用TRIzol提白色念珠菌RNA,发现没法破壁,那么在用TRIzol提之前,该怎么预处理啊,(麻烦说详细点,最近老是提不出啊)

PS:之前用EDTA,SDS化学法破壁,甚至用细胞破碎仪也都没有搞定!后面改用TRIzol发现还是没把那破细胞壁啊,
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好好工作
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yangqi

金虫 (小有名气)

我以前提放线菌的RNA的时候,先把洗过的菌丢到液氮里面冻个五分钟左右,再放到研钵里加液氮使劲磨,直到磨成细细的粉末,再加trizol,磨到冻结的trizol化开,破碎效果还可以。
磨的时候一定要用力,很累的。
人生,只有坚强,才能美好!
2楼2013-04-05 10:25:11
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lcat

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
南邮杨栋梁: 金币+10 2013-04-05 20:00:08
同意楼上,真菌一般要液氮研磨的。不过我们不同的是,磨成细细的粉末后,是把粉末加到预先加好trizol的小离心管里的,振荡器上剧烈振荡后继续往下做就可以了。
楼主注意研磨前一定要把菌体尽量弄干,不然含水的话一加液氮就成了冰疙瘩,根本磨不动。祝成功!
3楼2013-04-05 13:19:10
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南邮杨栋梁

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lcat at 2013-04-05 13:19:10
同意楼上,真菌一般要液氮研磨的。不过我们不同的是,磨成细细的粉末后,是把粉末加到预先加好trizol的小离心管里的,振荡器上剧烈振荡后继续往下做就可以了。
楼主注意研磨前一定要把菌体尽量弄干,不然含水的话一 ...

后天去试一下
好好工作
4楼2013-04-05 20:00:46
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i100sdu

木虫 (著名写手)

白色念珠菌用热酸性酚提RNA,为什么不多看看文献呢?
5楼2013-04-07 08:26:41
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南邮杨栋梁

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by i100sdu at 2013-04-07 08:26:41
白色念珠菌用热酸性酚提RNA,为什么不多看看文献呢?

有现成的步骤吗,可以发给我看看吗
好好工作
6楼2013-04-07 20:51:51
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tz6012

银虫 (初入文坛)

我们实验室使用,降玻璃珠和菌液放到一起,机械破碎。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2013-06-18 16:12:11
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南邮杨栋梁

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by tz6012 at 2013-06-18 16:12:11
我们实验室使用,降玻璃珠和菌液放到一起,机械破碎。

呵呵,谢谢,不过我后面用液氮研磨法,提出来的质量很不错!
好好工作
8楼2013-06-18 21:27:58
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