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南邮杨栋梁

银虫 (小有名气)

[求助] 用TRIzol提白色念珠菌RNA，发现没法破壁，那么在用TRIzol提之前，该怎么预处理啊，

用TRIzol提白色念珠菌RNA，发现没法破壁，那么在用TRIzol提之前，该怎么预处理啊，（麻烦说详细点，最近老是提不出啊）

PS：之前用EDTA,SDS化学法破壁，甚至用细胞破碎仪也都没有搞定！后面改用TRIzol发现还是没把那破细胞壁啊，
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好好工作
1楼 2013-04-04 20:47:58
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yangqi

金虫 (小有名气)
我以前提放线菌的RNA的时候，先把洗过的菌丢到液氮里面冻个五分钟左右，再放到研钵里加液氮使劲磨，直到磨成细细的粉末，再加trizol,磨到冻结的trizol化开，破碎效果还可以。
磨的时候一定要用力，很累的。
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人生，只有坚强，才能美好！
2楼2013-04-05 10:25:11
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lcat

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
南邮杨栋梁: 金币+10 2013-04-05 20:00:08
同意楼上，真菌一般要液氮研磨的。不过我们不同的是，磨成细细的粉末后，是把粉末加到预先加好trizol的小离心管里的，振荡器上剧烈振荡后继续往下做就可以了。
楼主注意研磨前一定要把菌体尽量弄干，不然含水的话一加液氮就成了冰疙瘩，根本磨不动。祝成功！
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3楼2013-04-05 13:19:10
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南邮杨栋梁

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lcat at 2013-04-05 13:19:10
同意楼上，真菌一般要液氮研磨的。不过我们不同的是，磨成细细的粉末后，是把粉末加到预先加好trizol的小离心管里的，振荡器上剧烈振荡后继续往下做就可以了。
楼主注意研磨前一定要把菌体尽量弄干，不然含水的话一 ...

后天去试一下
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好好工作
4楼2013-04-05 20:00:46
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i100sdu

木虫 (著名写手)
白色念珠菌用热酸性酚提RNA，为什么不多看看文献呢？
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5楼2013-04-07 08:26:41
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南邮杨栋梁

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by i100sdu at 2013-04-07 08:26:41
白色念珠菌用热酸性酚提RNA，为什么不多看看文献呢？

有现成的步骤吗，可以发给我看看吗
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好好工作
6楼2013-04-07 20:51:51
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tz6012

银虫 (初入文坛)
我们实验室使用，降玻璃珠和菌液放到一起，机械破碎。
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南邮杨栋梁
7楼2013-06-18 16:12:11
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南邮杨栋梁

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by tz6012 at 2013-06-18 16:12:11
我们实验室使用，降玻璃珠和菌液放到一起，机械破碎。

呵呵，谢谢，不过我后面用液氮研磨法，提出来的质量很不错！
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好好工作
8楼2013-06-18 21:27:58
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