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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » Trizol 法怎么提取高质量RNA
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langzian

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fuchange918: 金币+3, ★有帮助 2014-09-06 10:27:17
引用回帖:
10楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-09-06 08:10:54
第二遍酚氯仿的量应该是多少呢...

等体积，取上清时不可取到中间层，浪费也比有污染好

[ 发自小木虫客户端 ]
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江山
11楼2014-09-06 09:34:28
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fuchange918

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xipha at 2014-09-06 04:30:41
产物不溶看起来好像是你的样品里面蛋白或者糖类的含量比较高,糖类多可以参考植物RNA的提取方法,用氯化铝溶液先沉淀一遍. 蛋白高的话用酚氯仿多过一遍. 需要提醒的是这样处理完纯度是高了,RNA的量相对也小一点.

这次用高盐处理了一下，（提了4管），最后沉淀出来的东西都溶解了，而且跑胶胶孔里看起来也没多少杂质，有的看起来都没有杂质，但是用核酸蛋白测定仪测，OD值都是OD260/230=0.8  OD260/280=1.3 左右，这是为什么呢
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12楼2014-09-08 18:46:36
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fuchange918

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by niil at 2014-09-05 15:56:04
所需氯仿 乙醇 异丙醇常温即可。
离心的时候4度，其他操作常温也没有问题的。
第6步，一般还是加入等体积的异丙醇来沉淀。
“每次异丙醇沉淀离心后，管壁上总是粘有和底部沉淀一样的东西，”跟离心时不平衡有关。 ...

这次用高盐处理了一下，（提了4管），最后沉淀出来的东西都溶解了，而且跑胶胶孔里看起来也没多少杂质，有的看起来都没有杂质，但是用核酸蛋白测定仪测，OD值都是OD260/230=0.8  OD260/280=1.3 左右，请问这是为什么呢
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13楼2014-09-08 18:47:13
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xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-09-06 08:10:54
第二遍酚氯仿的量应该是多少呢...

可以用一样的比例
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14楼2014-09-09 08:18:36
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
fuchange918(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 09:24:32
用酚氯仿抽提固然很好，可是对你的RNA损失也比较大，所以直接用试剂盒就完全能满足你的需求，
生工的试剂盒不建议用来做RACE，这个毕竟要求也比较高，另外反转录试剂盒也要最好的。
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有你真好
15楼2014-09-09 08:45:03
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fuchange918

木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by a314919473 at 2014-09-09 08:45:03
用酚氯仿抽提固然很好，可是对你的RNA损失也比较大，所以直接用试剂盒就完全能满足你的需求，
生工的试剂盒不建议用来做RACE，这个毕竟要求也比较高，另外反转录试剂盒也要最好的。

RACE 买的clontech的Race试剂盒里自带反转录，现在就是纠结RNA提取不好
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16楼2014-09-09 10:17:06
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-09-09 10:17:06
RACE 买的clontech的Race试剂盒里自带反转录，现在就是纠结RNA提取不好...

QIAGEN的还是比较靠谱的。一般是实验操作步骤越少RNA质量越高，因为中间步骤都会损失RNA，做RACE,还是有必要买好产品提取RNA。
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有你真好
17楼2014-09-09 12:57:34
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hl5210

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
fuchange918: 金币+13, ★有帮助 2014-09-11 09:29:58
我都是加了trizol后摇匀放置10分钟，加完氯仿静止后才离心，没有把沉淀先离掉，提出的效果很好
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18楼2014-09-11 09:12:22
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若水空杯

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zuoyly at 2014-09-05 16:31:39
建议使用一个Vazyme公司的RNA isolater Total RNA Extraction Reagent试试，我使用的挺好的

我问一下，你提总RNA时的“Vazyme公司的RNA isolater Total RNA Extraction Reagent”怎么用的？我们实验室里有这个试剂，但是说明书没了
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每一个不曾起舞的日子，都是对生命的辜负！
19楼2014-11-25 21:37:00
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liubolin945

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by a314919473 at 2014-09-05 15:58:24
贵不贵要看你自己了，可以买便宜的例如生工的（一次大概10元），也可以买贵的例如QIAGEN的（一次大概70元），做RACE最好是用好一点的，我们也做这个服务的。仅供参考...

问一下，一次是只一个柱子吗？
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QQ：277046172
20楼2015-03-03 18:01:13
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