应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » Trizol 法怎么提取高质量RNA
232/3返回列表上一页123下一页
查看: 5510  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

langzian

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fuchange918: 金币+3, ★有帮助 2014-09-06 10:27:17
引用回帖:
10楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-09-06 08:10:54
第二遍酚氯仿的量应该是多少呢...

等体积，取上清时不可取到中间层，浪费也比有污染好

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
江山
11楼2014-09-06 09:34:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuchange918

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xipha at 2014-09-06 04:30:41
产物不溶看起来好像是你的样品里面蛋白或者糖类的含量比较高,糖类多可以参考植物RNA的提取方法,用氯化铝溶液先沉淀一遍. 蛋白高的话用酚氯仿多过一遍. 需要提醒的是这样处理完纯度是高了,RNA的量相对也小一点.

这次用高盐处理了一下，（提了4管），最后沉淀出来的东西都溶解了，而且跑胶胶孔里看起来也没多少杂质，有的看起来都没有杂质，但是用核酸蛋白测定仪测，OD值都是OD260/230=0.8  OD260/280=1.3 左右，这是为什么呢
赞一下 回复此楼
12楼2014-09-08 18:46:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuchange918

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by niil at 2014-09-05 15:56:04
所需氯仿 乙醇 异丙醇常温即可。
离心的时候4度，其他操作常温也没有问题的。
第6步，一般还是加入等体积的异丙醇来沉淀。
“每次异丙醇沉淀离心后，管壁上总是粘有和底部沉淀一样的东西，”跟离心时不平衡有关。 ...

这次用高盐处理了一下，（提了4管），最后沉淀出来的东西都溶解了，而且跑胶胶孔里看起来也没多少杂质，有的看起来都没有杂质，但是用核酸蛋白测定仪测，OD值都是OD260/230=0.8  OD260/280=1.3 左右，请问这是为什么呢
赞一下 回复此楼
13楼2014-09-08 18:47:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-09-06 08:10:54
第二遍酚氯仿的量应该是多少呢...

可以用一样的比例
赞一下 回复此楼
14楼2014-09-09 08:18:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
fuchange918(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 09:24:32
用酚氯仿抽提固然很好，可是对你的RNA损失也比较大，所以直接用试剂盒就完全能满足你的需求，
生工的试剂盒不建议用来做RACE，这个毕竟要求也比较高，另外反转录试剂盒也要最好的。
赞一下 回复此楼
有你真好
15楼2014-09-09 08:45:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuchange918

木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by a314919473 at 2014-09-09 08:45:03
用酚氯仿抽提固然很好，可是对你的RNA损失也比较大，所以直接用试剂盒就完全能满足你的需求，
生工的试剂盒不建议用来做RACE，这个毕竟要求也比较高，另外反转录试剂盒也要最好的。

RACE 买的clontech的Race试剂盒里自带反转录，现在就是纠结RNA提取不好
赞一下 回复此楼
16楼2014-09-09 10:17:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-09-09 10:17:06
RACE 买的clontech的Race试剂盒里自带反转录，现在就是纠结RNA提取不好...

QIAGEN的还是比较靠谱的。一般是实验操作步骤越少RNA质量越高，因为中间步骤都会损失RNA，做RACE,还是有必要买好产品提取RNA。
赞一下 回复此楼
有你真好
17楼2014-09-09 12:57:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl5210

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
fuchange918: 金币+13, ★有帮助 2014-09-11 09:29:58
我都是加了trizol后摇匀放置10分钟，加完氯仿静止后才离心，没有把沉淀先离掉，提出的效果很好
赞一下 回复此楼
18楼2014-09-11 09:12:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

若水空杯

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zuoyly at 2014-09-05 16:31:39
建议使用一个Vazyme公司的RNA isolater Total RNA Extraction Reagent试试，我使用的挺好的

我问一下，你提总RNA时的“Vazyme公司的RNA isolater Total RNA Extraction Reagent”怎么用的？我们实验室里有这个试剂，但是说明书没了
赞一下 回复此楼
每一个不曾起舞的日子，都是对生命的辜负！
19楼2014-11-25 21:37:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liubolin945

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by a314919473 at 2014-09-05 15:58:24
贵不贵要看你自己了，可以买便宜的例如生工的（一次大概10元），也可以买贵的例如QIAGEN的（一次大概70元），做RACE最好是用好一点的，我们也做这个服务的。仅供参考...

问一下，一次是只一个柱子吗？
赞一下 回复此楼
QQ：277046172
20楼2015-03-03 18:01:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fuchange918 的主题更新
232/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +40 医学老男孩 2026-08-13 92/4600 2026-08-18 09:48 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +4 基诺咪客 2026-08-17 5/250 2026-08-18 08:03 by 基诺咪客
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭