| 查看: 2330 | 回复: 30 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
小茶91520兑换贵宾
|
[求助]
各位虫友能帮忙分析下我提取的果实RNA问题可能出在哪吗？ 已有9人参与
|
|
|
操作步骤 1) 取 800ul 提取缓冲液加入 2ml 离心管中，预热至 65℃ 2) 取新鲜样品放入研钵，在液氮中迅速研磨成粉末状。 3) 迅速将 50-100mg 粉末状样品转入预热的提取缓冲液中， 涡旋振荡器混匀，65℃水浴 10min，每隔 2min 混匀一次。 4) 水浴结束后， 冷却至室温。 5) 向离心管中加入等体积氯仿/异戊醇(24:1)， 涡旋振荡器充分混匀，冰浴10min。 6) 离心管在 4℃下 12000×g 离心 10min。 7) 取上清，转入新的 2ml 离心管，重复操作(5)、 (6)。注：如果中间层仍有物质，可以继续重复步骤（ 5）和（ 6），直至中间层较干净为止（但最多抽提 4 次，过柱时抽提 3 次，否组次数太多会降解）。 8) 取上清，转入新的 1.5ml 离心管中， 加入 1/3 体积的 8M LiCl，混匀，加入等体积的异丙醇，混匀， 放入-20℃冰箱1小时。 9) 4℃， 12000×g 离心 15 min。弃掉上清，注意不要倒出沉淀。 10) 向 RNA 沉淀中加入 1ml 75％乙醇， 漩涡振荡器上振荡混匀 5s， 4oC， 7500×g离心 5min，弃上清。 11) 4oC， 7500×g 离心 1min，用枪头小心吸弃多余液体。 提取了很多次，效果都不好！恳请各位帮忙分析一下！图中间是mark，右边是实验提取的RNA。是不是RNA降解的太厉害？还是DNA降解所出现的拖尾现象？  IMG_2443.JPG |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有177人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有6人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 第一次提RNA,请各位前辈指点！
已经有4人回复
- 提取的RNA电泳后条带
已经有6人回复
- 求助各位大神啊 关于植物果实RNA提取过程中碾碎问题
已经有4人回复
- 求问提RNA的样品需要加入Trizol保存吗？
已经有5人回复
- Trizol 法怎么提取高质量RNA
已经有22人回复
- 帮忙看一下提的真菌RNA 跑的电泳 谢谢啦~~~
已经有17人回复
- 总RNA电泳图求分析
已经有7人回复
- 请问在提RNA的时候，用氯仿：异戊醇=24:1，还是用氯仿？
已经有8人回复
- 细胞RNA提取一直失败 ，什么原因？
已经有8人回复
- 姜的总RNA提取，电泳只有一条带
已经有29人回复
- Trizol提取的RNA有粘稠，跑胶有amear，怎么处理？
已经有8人回复
- 请大家帮我分析下我提的质粒怎么这么多条带呀?
已经有10人回复
- RNA提取电泳效果不好
已经有12人回复
- 有关细胞总RNA提取
已经有16人回复
- 提取的RNA 浓度低还能做电泳检测质量吗？
已经有3人回复
- Trizol 法 RNA提取失败 请虫友帮忙分析下 什么原因?该怎么办吖
已经有18人回复
- RNA电泳图分析
已经有10人回复
- 植物RNA提取电泳图，求解析！
已经有3人回复
- 提取RNA后，反转录后用β-actinpcr很多条带
已经有20人回复
- 提取的rna浓度只有60ng/ul，影响逆转录吗，请好心虫友指点
已经有17人回复
- 植物RNA提取试剂盒
已经有9人回复
- 质粒DNA提取成了这样，请大家帮忙分析一下
已经有27人回复
小茶91520
兑换贵宾
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 95.3
- 散金: 80
- 红花: 1
- 帖子: 73
- 在线: 108.2小时
- 虫号: 1468277
- 注册: 2011-10-30
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
9楼2015-06-17 08:47:54
2楼2015-06-16 20:17:46
小茶91520
兑换贵宾
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 95.3
- 散金: 80
- 红花: 1
- 帖子: 73
- 在线: 108.2小时
- 虫号: 1468277
- 注册: 2011-10-30
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
3楼2015-06-16 21:50:04
Neo2000
实习版主
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2015-06-16 23:34:49
