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易水秋寒

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看条带的大小不是RNA,更像是DNA
11楼2015-06-17 14:14:08
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clive931

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 小茶91520 at 2015-06-17 08:47:54
是吗?oh, no !...

RNA提取我们都是啊冰浴操作的。65度10分钟是什么情况啊。

[ 发自小木虫客户端 ]
12楼2015-06-17 14:22:07
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trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我在提取RNA的时候好像没有预热的过程吧,还需要低温操作呢,你65℃是不是把RNA降解了,
建议改进提取方法。
任重道远……
13楼2015-06-17 15:24:11
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lichj

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小茶91520: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-06-17 16:36:38
从图上看RNA明显降解了。不知道你的试剂是什么配方,植物中富含多酚和多糖,果实中多糖含量很高,用常用试剂通常效果不好,现在有很多文献,里面是一些改良方法,比如加入PVP除酚类物质,巯基乙醇防止氧化,licl是可以除多糖的,但是它在沉淀RNA的时候是选择性沉淀分子量大的RNA,一些低分子量的可能会丢失,你如果做小RNA,或tRNA类的研究最好不用此方法,可以用终浓度10%的乙醇离心去除多糖。多查查文献吧,我们提这一类的植物RNA都是自己配制的试剂,比试剂盒好一些。
14楼2015-06-17 15:39:15
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小茶91520

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by clive931 at 2015-06-17 14:22:07
RNA提取我们都是啊冰浴操作的。65度10分钟是什么情况啊。
...

这个是为了释放RNA吧?
15楼2015-06-17 16:12:08
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小茶91520

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by trizol11 at 2015-06-17 15:24:11
我在提取RNA的时候好像没有预热的过程吧,还需要低温操作呢,你65℃是不是把RNA降解了,
建议改进提取方法。

65℃水浴不是破坏细胞壁,释放RNA吗?
16楼2015-06-17 16:34:04
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小茶91520

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by lichj at 2015-06-17 15:39:15
从图上看RNA明显降解了。不知道你的试剂是什么配方,植物中富含多酚和多糖,果实中多糖含量很高,用常用试剂通常效果不好,现在有很多文献,里面是一些改良方法,比如加入PVP除酚类物质,巯基乙醇防止氧化,licl是可 ...

你好!非常感谢你的回答!我的配方如图
提取的RNA主要是做实时定量PCR
各位虫友能帮忙分析下我提取的果实RNA问题可能出在哪吗?
ctab.jpg

17楼2015-06-17 16:36:01
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zhqingfang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你提取到的不是RNA,至少已经降解了。
实验忙碌中
18楼2015-06-17 16:37:36
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zhqingfang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你改用 TrizolRNA提取试剂盒重新试试看,TAKARA
实验忙碌中
19楼2015-06-17 16:40:49
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clive931

金虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 小茶91520 at 2015-06-17 16:12:08
这个是为了释放RNA吧?...

液氮研磨不就是释放了吗。低温防止降解。我们做的是丝状真菌。

[ 发自小木虫客户端 ]
20楼2015-06-17 16:41:24
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