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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 各位虫友能帮忙分析下我提取的果实RNA问题可能出在哪吗？
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易水秋寒

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看条带的大小不是RNA，更像是DNA
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11楼2015-06-17 14:14:08
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clive931

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 小茶91520 at 2015-06-17 08:47:54
是吗？oh, no ！...

RNA提取我们都是啊冰浴操作的。65度10分钟是什么情况啊。

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12楼2015-06-17 14:22:07
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trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我在提取RNA的时候好像没有预热的过程吧，还需要低温操作呢，你65℃是不是把RNA降解了，
建议改进提取方法。
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任重道远……
13楼2015-06-17 15:24:11
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lichj

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小茶91520: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-06-17 16:36:38
从图上看RNA明显降解了。不知道你的试剂是什么配方，植物中富含多酚和多糖，果实中多糖含量很高，用常用试剂通常效果不好，现在有很多文献，里面是一些改良方法，比如加入PVP除酚类物质，巯基乙醇防止氧化，licl是可以除多糖的，但是它在沉淀RNA的时候是选择性沉淀分子量大的RNA，一些低分子量的可能会丢失，你如果做小RNA，或tRNA类的研究最好不用此方法，可以用终浓度10%的乙醇离心去除多糖。多查查文献吧，我们提这一类的植物RNA都是自己配制的试剂，比试剂盒好一些。
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14楼2015-06-17 15:39:15
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小茶91520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by clive931 at 2015-06-17 14:22:07
RNA提取我们都是啊冰浴操作的。65度10分钟是什么情况啊。
...

这个是为了释放RNA吧？
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15楼2015-06-17 16:12:08
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小茶91520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by trizol11 at 2015-06-17 15:24:11
我在提取RNA的时候好像没有预热的过程吧，还需要低温操作呢，你65℃是不是把RNA降解了，
建议改进提取方法。

65℃水浴不是破坏细胞壁，释放RNA吗？
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16楼2015-06-17 16:34:04
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小茶91520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by lichj at 2015-06-17 15:39:15
从图上看RNA明显降解了。不知道你的试剂是什么配方，植物中富含多酚和多糖，果实中多糖含量很高，用常用试剂通常效果不好，现在有很多文献，里面是一些改良方法，比如加入PVP除酚类物质，巯基乙醇防止氧化，licl是可 ...

你好！非常感谢你的回答!我的配方如图
提取的RNA主要是做实时定量PCR
各位虫友能帮忙分析下我提取的果实RNA问题可能出在哪吗？
ctab.jpg
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17楼2015-06-17 16:36:01
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zhqingfang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你提取到的不是RNA，至少已经降解了。
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实验忙碌中
18楼2015-06-17 16:37:36
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zhqingfang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你改用 ＴｒｉｚｏｌRNA提取试剂盒重新试试看，TAKARA
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实验忙碌中
19楼2015-06-17 16:40:49
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clive931

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 小茶91520 at 2015-06-17 16:12:08
这个是为了释放RNA吧？...

液氮研磨不就是释放了吗。低温防止降解。我们做的是丝状真菌。

[ 发自小木虫客户端 ]
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20楼2015-06-17 16:41:24
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