| 查看: 6786 | 回复: 15 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
我是传奇456金虫 (正式写手)
|
[求助]
SDS-PAGE条带完全不清晰，求助！ 已有4人参与
|
||
|
RT，几次SDS-PAGE跑完后，染色都是这个样子，之前用G250快染也是，这次用的R250染了一夜也是这样，都是条带上部分拖的特别严重，所有蛋白条带基本都看不清。。 求助啊！   1.JPG  2.JPG |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白表达纯化与检测 |
» 猜你喜欢
申请科研项目纯靠实力能成功吗？
已经有12人回复
-
40+中年人失业后，还能找到好工作吗？
已经有13人回复
-
用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么
已经有6人回复
-
极限拉扯，如何抉择
已经有15人回复
-
二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores
已经有4人回复
-
OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？
已经有13人回复
-
课题组会帮你通过考核么？
已经有7人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有10人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 单点突变后跑SDS-PAGE目的条带的分子量小了一半
已经有5人回复
- 苏云金芽孢杆菌晶体蛋白SDS-PAGE电泳条带不全，模糊不清，急死了
已经有10人回复
- 跑SDS-PAGE时 maker条带还不错可是蛋白条带特别浅 求指点
已经有19人回复
- sds-page 凝胶电泳求助 只有marker条带是清晰的，但宽窄不一
已经有18人回复
- SDS-PAGE，条带压缩不好，溶液全部重配还是不好。
已经有17人回复
- SDS-PAGE两条带，Native-PAGE一条带能证明蛋白是纯的吗？
已经有7人回复
- SDS-PAGE中蛋白条带位置不一致
已经有13人回复
- 急~~~！！！sds-page电泳，重复了n次，都是这种死样子！
已经有10人回复
- SDS-page 原核表达蛋白 电泳条带弥散
已经有6人回复
- SDS-PAGE电泳marker和样品的条带是歪的
已经有12人回复
- SDS-PAGE 到下方小分子蛋白模糊，分不开
已经有18人回复
- SDS-PAGE凝胶电泳跑出来的条带问题
已经有20人回复
- SDS-PAGE电泳图条带分析
已经有19人回复
- 求助 sds-page 条带虚，marker 最后一条带拖尾
已经有10人回复
- 求助！单体蛋白在SDS-PAGE中出现了倍数关系的大条带！
已经有8人回复
- SDS-PAGE电泳求助，为什么上面条带清晰，下面不清晰，而且会有条像糊了似的带
已经有8人回复
- SDS-PAGE蛋白电泳同一蛋白不同loading buffer条带不一样
已经有7人回复
- Tricine-SDS-PAGE电泳到大约距离底部1/3处出现问题条带扭曲
已经有8人回复
- SDS-PAGE什么条带都没有
已经有10人回复
- sds page 跑不出条带
已经有11人回复
- SDS-PAGE后面几条带弥散求助
已经有15人回复
- SDS-PAGE 我的样品没有跑出条带，请教高手！谢谢！
已经有7人回复
- SDS-PAGE蛋白电泳条带问题
已经有7人回复
calorimetry
铜虫 (正式写手)
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 126.8
- 红花: 13
- 帖子: 569
- 在线: 36.5小时
- 虫号: 3901654
- 注册: 2015-06-01
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
|
SDS-PAGE 电泳问题讨论（实例版）-----凌波丽个人总结之四 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7324819 这是我在米国的师姐写的，原来也是她给我们实验辅导用的一部分材料，楼主可以参考。 |
4楼2015-06-11 17:29:17
恶魔的左眼
木虫 (正式写手)
- 应助: 110 (高中生)
- 金币: 2237.7
- 红花: 20
- 帖子: 425
- 在线: 880.6小时
- 虫号: 3705608
- 注册: 2015-03-03
- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
我是传奇456: 金币+4, ★★★很有帮助, 多谢！ 2015-06-12 12:23:33
感谢参与，应助指数 +1
我是传奇456: 金币+4, ★★★很有帮助, 多谢！ 2015-06-12 12:23:33
|
一、SDS PAGE电泳带弥散和拖尾的原因和改进措施 1.原因一：上样量过多，应该减少上样量。对策：加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15μL（即2-10μg蛋白质）。如果样品很稀上样量可以达到100μL。 2.原因二：样品溶解不完全。 对策： （1）样品应该充分溶解：保持各种蛋白表达样品和Marker在上样前能够充分溶解，上样前最好离心一下，实在溶解不掉的颗粒就去掉。 (2)可以根据分子量标准的蛋白质试剂盒的要求加入样品溶解液；如果是自行配置标准和未知样品，按照0.5-1.0mg/L样品溶解液。溶解后，将其转移至Eppendorf管，盖上盖子（可以在盖子处加上卡子）后在110度沸水中水浴加热3分钟（可以在薄泡沫塑料板上钻出几个与Eppendorf管直径形同的圆洞，Eppendorf管放下去直到盖子边缘约束不能再往下为止，把薄泡沫塑料板的暴露出Eppendorf管的管体大部分的那一面放入沸水浴锅中，薄泡沫塑料板自然飘在沸水表面，便于取用和加热，也可避免沸水溅起。可以一批对于多个Eppendorf管进行不同时间的沸水浴。不要把Eppendorf管扔进沸水浴锅中，盖子可能会被冲开），而后在室温下冷却待用。如果较长时间不用，则将样品放入零下20度冰箱中储存，需用时在取出后使用前在110度沸水中加热3分钟室温冷却后再上样，以去掉样品蛋白质中的亚稳态聚合体。 （3）改变样品缓冲溶液使得样品能够充分溶解，SDS 用量要充分。 |
2楼2015-06-11 16:51:00
calorimetry
铜虫 (正式写手)
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 126.8
- 红花: 13
- 帖子: 569
- 在线: 36.5小时
- 虫号: 3901654
- 注册: 2015-06-01
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2015-06-11 17:26:34
luwei13566
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 184 (高中生)
- 金币: 4352.9
- 散金: 97
- 红花: 35
- 帖子: 641
- 在线: 261.1小时
- 虫号: 2380655
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2015-06-12 01:30:53
200