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mvan

新虫 (初入文坛)

[交流] DNA提取中加入醋酸钠和无水乙醇后,有明显的絮状物出现，但离心后无沉淀 已有9人参与

DNA提取中加入醋酸钠和无水乙醇,-20度过夜，有明显的絮状物出现，但离心后无沉淀。轻柔颠倒离心管后，有微量白色絮状物出现，之后再离心仍然看不到沉淀。然后倒掉无水乙醇，残留的一点无水乙醇流回管底后，又出现白色絮状物。困扰我很久了，不知道是什么原因
PS：酚氯仿抽提法，材料为昆虫的组织
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1楼 2015-06-10 15:04:20
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luwei13566

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6楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-06-11 10:55:11
醋酸钠作用是析出蛋白质，而乙醇是用来析出DNA的。。。都加进去，完全分不开啊。大侠

同学，你对醋酸钠的理解是不对的，竟还有人点赞，所以需要更正一下你的说法避免误导: 醋酸钠完全不是所谓去除蛋白用的，而是中和屏蔽掉DNA表面的负电荷，进而促进DNA分子间的相互聚集提高乙醇沉淀DNA的效率。蛋白是在上一步的酚仿抽提中除去的。

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15楼2015-06-15 01:06:11
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
醋酸钠作用是析出蛋白质，而乙醇是用来析出DNA的。。。都加进去，完全分不开啊。大侠
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6楼2015-06-11 10:55:11
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luwei13566

木虫 (正式写手)
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LZ的问题我觉得还是提取的量少。在管底呈半透明状，所以不好辨别所致。

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大家相互帮助哈
16楼2015-06-15 01:16:51
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Cindycclove

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离心时间长一点呢~是不是离心时间不够啊。
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2楼2015-06-10 16:04:31
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mvan

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2楼: Originally posted by Cindycclove at 2015-06-10 16:04:31
离心时间长一点呢~是不是离心时间不够啊。

离心十分钟，然后离心五分钟，又离心五分钟，还是没有
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3楼2015-06-10 19:29:26
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illidanyy

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温度呢 试试低温离心
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努力不一定有回报不努力一定没有回报
4楼2015-06-10 21:43:31
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Cindycclove

新虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by mvan at 2015-06-10 19:29:26
离心十分钟，然后离心五分钟，又离心五分钟，还是没有...

我一般是12000转，4度离心10min,有看到说离心时间越久，小片段越容易沉淀下来。后来就改成20min了，你确定你看见的沉淀是DNA，而不是蛋白质之类的么。。。
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5楼2015-06-11 10:47:39
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bingrener

铜虫 (初入文坛)
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DNA如果不是特别多的话看不到很正常吧，小心点操作最后干了应该能看到一个小白点。试试低温离心半小时
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7楼2015-06-11 12:18:10
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jingyu501

禁虫 (正式写手)
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本帖内容被屏蔽
8楼2015-06-11 13:31:54
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mvan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Cindycclove at 2015-06-11 10:47:39
我一般是12000转，4度离心10min,有看到说离心时间越久，小片段越容易沉淀下来。后来就改成20min了，你确定你看见的沉淀是DNA，而不是蛋白质之类的么。。。...

是低温离心呢。我也在想这个问题，可能那些沉淀就不是DNA，是我没提出来的太少或者没提出来吧
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9楼2015-06-14 17:02:01
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mvan

新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-06-11 10:55:11
醋酸钠作用是析出蛋白质，而乙醇是用来析出DNA的。。。都加进去，完全分不开啊。大侠

醋酸钠不是调节ph值，促进DNA沉淀吗？
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10楼2015-06-14 17:03:18
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