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1楼2012-04-11 13:44:25

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atlanticwi

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danyzj01: 回帖置顶 2012-04-21 09:34:30

引用回帖:

5楼: Originally posted by danyzj01 at 2012-04-11 22:51:26:
请问你用的是什么方法，是文献的还是自己摸索或改进的呢

我们提取植物gDNA，一般采取CTAB法，文献中本来就有改进过多个的版本，我们采取合适的版本，至今沿用下来，没有改过
提取RNA时，采用TRIzol法，我自个按照文献方案进行了20+以上的提取，发现一直存在有A260/230比值过低的问题，最后根据手头资料改进后续步骤后，继续试验5+以上次数后确定有效，才做自行修订方案的。
国外有影响的杂志对实验的重复性要求很高，所以对实验方案的描述要求都是严之又严，采用这类杂志的方案普遍都是没有问题的，若有改进也是在重复多次发现问题反复出现后才思考改进的。

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6楼2012-04-11 23:04:23

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atlanticwi

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danyzj01: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2012-04-21 09:37:35

嗯.................
你指的是核酸共沉剂吗，我一般用NaAc，NaCl，KAc木有用过，不过按照共沉剂的作用是提供一价阳离子中和DNA的负电荷，从而中和DNA分子间排斥作用，以达到共沉淀的效果来看，K离子也是可以用的，但具体没有应用过，不敢乱说
个人看法，若有说错请高手指正

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2楼2012-04-11 14:06:05

danyzj01

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2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-04-11 14:06:05:
嗯.................
你指的是核酸共沉剂吗，我一般用NaAc，NaCl，KAc木有用过，不过按照共沉剂的作用是提供一价阳离子中和DNA的负电荷，从而中和DNA分子间排斥作用，以达到共沉淀的效果来看，K离子也是可以用的 ...

他这个方法前面有加NaAC和NaCL，后面又加了点KAC，不知道能否全部替换成NaAC，纯纳离子也是没关系才对吧？
那么有EDTA参与的溶剂可以全部替换成EDTA二钠来使用吗？

3楼2012-04-11 21:32:30

atlanticwi

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3楼: Originally posted by danyzj01 at 2012-04-11 21:32:30:
他这个方法前面有加NaAC和NaCL，后面又加了点KAC，不知道能否全部替换成NaAC，纯纳离子也是没关系才对吧？
那么有EDTA参与的溶剂可以全部替换成EDTA二钠来使用吗？

1. 如果你是按照某人的文献方法，那在做出结果前一定按照原方法来，不管有多么麻烦，若你重复出结果后，再有空考虑改方法
2. EDTA再溶液中溶解的条件基本都要pH8.0以上了，如果没法溶解，你还要调pH，加NaOH就等同用了二钠，所以没有特定说明下，EDTA和其二钠盐没有区别.......至少偶现在还么见过

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4楼2012-04-11 21:40:10

danyzj01

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4楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-04-11 21:40:10:
1. 如果你是按照某人的文献方法，那在做出结果前一定按照原方法来，不管有多么麻烦，若你重复出结果后，再有空考虑改方法
2. EDTA再溶液中溶解的条件基本都要pH8.0以上了，如果没法溶解，你还要调pH，加NaOH就等 ...

请问你用的是什么方法，是文献的还是自己摸索或改进的呢

5楼2012-04-11 22:51:26