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土壤DNA跑pcr一直出现如影随形的两条带，这是为什么
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我在做土壤微生物，用试剂盒提取了DNA之后跑pcr，一开始还能出现但一条带，如图一，然后做割胶回收之后再检测发现有很严重的拖带现象，后面再做PCR优化条件的时候就一直出现这个情况：只要能跑出来带，就是如影随形的两条，要不就是一点都没有，如图二，这是什么原因，怎么改进，求教各位大神帮忙:drhttp://muchong.com/bbs/images/smilies/dragon/14.gifagon14: IMG_20130718_123356.jpg  IMG_20130722_190146.jpg |
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zhangbighui
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【答案】应助回帖
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陌落雅(amisking代发): 金币+2, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-07-26 17:46:08
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陌落雅(amisking代发): 金币+2, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-07-26 17:46:08
| 我做过破碎全菌后直接跑样后就会出现很多条带，这些条带有DNA还有28S和16S等RNA条带。所以我认为你出现两条条带有可能是DNA提取时没有加RNA酶造成RNA污染引起PCR非特异性条带，不知你提取DNA后有没有做纯度检测。再者你的引物可能设计的特异性不强，因为杂带都是出现在同一位置很均一。三者也是在引物本身是否有二级结构，在PCR过程中形成引物二聚体。胶回收后检测出现杂带可能是DNA降解的结果。你可以再从头做一遍DNA提取，注意每步的纯度检测和评估引物的特异性。祝你实验顺利。 |
2楼2013-07-26 15:53:58
3楼2013-07-26 18:14:48
zhangbighui
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4楼2013-07-26 20:23:46
5楼2013-07-27 13:03:59
