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mvan

新虫 (初入文坛)

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8楼: Originally posted by jingyu501 at 2015-06-11 13:31:54
你材料能多加点?不过动物细胞的,还好提吧~

材料本来就很少,加多一点感觉消化不完全。不知道是操作的问题还是材料的问题,提出来的质量都不高,降解很严重,成功率不高。
11楼2015-06-14 17:08:29
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mvan

新虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by illidanyy at 2015-06-10 21:43:31
温度呢 试试低温离心

是低温离心的
12楼2015-06-14 17:11:50
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Cindycclove

新虫 (小有名气)


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9楼: Originally posted by mvan at 2015-06-14 17:02:01
是低温离心呢。我也在想这个问题,可能那些沉淀就不是DNA,是我没提出来的太少或者没提出来吧...

你最后有跑胶看下是否提出来东西了吗。我有时候也看不见车沉淀,我还是加了水,然后跑胶,就是量少·
13楼2015-06-14 17:45:34
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mvan

新虫 (初入文坛)

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13楼: Originally posted by Cindycclove at 2015-06-14 17:45:34
你最后有跑胶看下是否提出来东西了吗。我有时候也看不见车沉淀,我还是加了水,然后跑胶,就是量少·...

看了,都是很亮的拖带
14楼2015-06-14 18:27:25
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luwei13566

木虫 (正式写手)


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6楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-06-11 10:55:11
醋酸钠作用是析出蛋白质,而乙醇是用来析出DNA的。。。都加进去,完全分不开啊。大侠

同学,你对醋酸钠的理解是不对的,竟还有人点赞,所以需要更正一下你的说法避免误导: 醋酸钠完全不是所谓去除蛋白用的,而是中和屏蔽掉DNA表面的负电荷,进而促进DNA分子间的相互聚集提高乙醇沉淀DNA的效率。蛋白是在上一步的酚仿抽提中除去的。

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大家相互帮助哈
15楼2015-06-15 01:06:11
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luwei13566

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
LZ的问题我觉得还是提取的量少。在管底呈半透明状,所以不好辨别所致。

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大家相互帮助哈
16楼2015-06-15 01:16:51
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Cindycclove

新虫 (小有名气)


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14楼: Originally posted by mvan at 2015-06-14 18:27:25
看了,都是很亮的拖带...

挂孔吗?挂孔一般都是蛋白质~我觉得问题还是在你提取上,是传统方法还是试剂盒呢?多抽提几次~
17楼2015-06-15 10:42:11
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)



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5楼: Originally posted by Cindycclove at 2015-06-11 10:47:39
我一般是12000转,4度离心10min,有看到说离心时间越久,小片段越容易沉淀下来。后来就改成20min了,你确定你看见的沉淀是DNA,而不是蛋白质之类的么。。。...

一般我都是15到20分钟这一步,少没关系有就好啊!

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18楼2015-06-15 11:00:30
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逍遥e宝

铁杆木虫 (正式写手)

我爱黄赌毒


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取上层水相于新的EP管中,加入30μl 3M NaAc(PH=5.2),1ml 无水乙醇,-20℃放置1h或过夜。4℃ 12000转离心15min,小心弃上清,加70%乙醇(100μl),漂洗干燥。
无数老鼠的生命祭奠了我被偷走的那五年---------------forever宝
19楼2015-06-15 11:03:59
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)


20mini

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20楼2015-06-15 11:04:55
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