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mvan

新虫 (初入文坛)

[交流] DNA提取中加入醋酸钠和无水乙醇后,有明显的絮状物出现,但离心后无沉淀已有9人参与

DNA提取中加入醋酸钠和无水乙醇,-20度过夜,有明显的絮状物出现,但离心后无沉淀。轻柔颠倒离心管后,有微量白色絮状物出现,之后再离心仍然看不到沉淀。然后倒掉无水乙醇,残留的一点无水乙醇流回管底后,又出现白色絮状物。困扰我很久了,不知道是什么原因
PS:酚氯仿抽提法,材料为昆虫的组织
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mvan

新虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by Cindycclove at 2015-06-10 16:04:31
离心时间长一点呢~是不是离心时间不够啊。

离心十分钟,然后离心五分钟,又离心五分钟,还是没有
3楼2015-06-10 19:29:26
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mvan

新虫 (初入文坛)

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5楼: Originally posted by Cindycclove at 2015-06-11 10:47:39
我一般是12000转,4度离心10min,有看到说离心时间越久,小片段越容易沉淀下来。后来就改成20min了,你确定你看见的沉淀是DNA,而不是蛋白质之类的么。。。...

是低温离心呢。我也在想这个问题,可能那些沉淀就不是DNA,是我没提出来的太少或者没提出来吧
9楼2015-06-14 17:02:01
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mvan

新虫 (初入文坛)

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6楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-06-11 10:55:11
醋酸钠作用是析出蛋白质,而乙醇是用来析出DNA的。。。都加进去,完全分不开啊。大侠

醋酸钠不是调节ph值,促进DNA沉淀吗?
10楼2015-06-14 17:03:18
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mvan

新虫 (初入文坛)

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8楼: Originally posted by jingyu501 at 2015-06-11 13:31:54
你材料能多加点?不过动物细胞的,还好提吧~

材料本来就很少,加多一点感觉消化不完全。不知道是操作的问题还是材料的问题,提出来的质量都不高,降解很严重,成功率不高。
11楼2015-06-14 17:08:29
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mvan

新虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by illidanyy at 2015-06-10 21:43:31
温度呢 试试低温离心

是低温离心的
12楼2015-06-14 17:11:50
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mvan

新虫 (初入文坛)

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13楼: Originally posted by Cindycclove at 2015-06-14 17:45:34
你最后有跑胶看下是否提出来东西了吗。我有时候也看不见车沉淀,我还是加了水,然后跑胶,就是量少·...

看了,都是很亮的拖带
14楼2015-06-14 18:27:25
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mvan

新虫 (初入文坛)

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17楼: Originally posted by Cindycclove at 2015-06-15 10:42:11
挂孔吗?挂孔一般都是蛋白质~我觉得问题还是在你提取上,是传统方法还是试剂盒呢?多抽提几次~...

很少很少有挂孔的。传统方法,酚氯仿抽提。
21楼2015-06-17 10:39:59
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mvan

新虫 (初入文坛)

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16楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-06-15 01:16:51
LZ的问题我觉得还是提取的量少。在管底呈半透明状,所以不好辨别所致。

嗯嗯,最后检测出来还是有的,就是降解严重…
22楼2015-06-17 10:42:32
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