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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » DNA提取过程中用无水乙醇沉淀DNA离心应该多大转速
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)

[求助] DNA提取过程中用无水乙醇沉淀DNA离心应该多大转速 已有7人参与

在DNA提取过程中用无水乙醇沉淀DNA，看了很多的文献都是将离心力设置很大，10000~13000，但离心转速大，DNA沉淀又不易溶解，离心应该多大转速，大家一起来交流一下心得！
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1楼 2014-07-22 19:51:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-23 12:49:05
10000 or more.....
离心力的大小和溶解没关系。不容易溶解可能是你干燥时间太久的缘故。
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3楼2014-07-22 20:48:37
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-07-23 09:17:14
分子克隆里的表述就是低温离心机的最大转速都可以~关键是低温配合的高转速。
至于你DNA溶解不了那是你的DNA杂质太多，如果混有蛋白用乙醇沉淀是除不去的，最后也溶解不了。建议你乙醇沉淀前加一步本酚氯仿抽提除去些蛋白和有机杂质，DNA本身很好溶的。
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大家相互帮助哈
4楼2014-07-22 23:59:20
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普通回帖

yigeren8

金虫 (初入文坛)
12000

[ 发自小木虫客户端 ]
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我要赚金币！！！
2楼2014-07-22 20:42:44
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-22 23:59:20
分子克隆里的表述就是低温离心机的最大转速都可以~关键是低温配合的高转速。
至于你DNA溶解不了那是你的DNA杂质太多，如果混有蛋白用乙醇沉淀是除不去的，最后也溶解不了。建议你乙醇沉淀前加一步本酚氯仿抽提除去 ...

酚氯仿有抽提过的
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5楼2014-07-23 00:15:21
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by wuweifeng710 at 2014-07-23 00:15:21
酚氯仿有抽提过的...

无水乙醇沉淀后用百分之七漂洗过吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
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大家相互帮助哈
6楼2014-07-23 01:10:18
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usky_4

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-07-23 09:17:19
低温（一般4°）最大转速，其中低温是重点，转速并不会影响DNA溶解
如果DNA不易溶有可能是干燥过久，或者是杂质过多
酚氯仿抽提时有没有加异戊醇？
无水酒精洗涤后可以再用70%酒精洗一次
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下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
7楼2014-07-23 01:39:05
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lemond

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-23 01:39:05
低温（一般4°）最大转速，其中低温是重点，转速并不会影响DNA溶解
如果DNA不易溶有可能是干燥过久，或者是杂质过多
酚氯仿抽提时有没有加异戊醇？
无水酒精洗涤后可以再用70%酒精洗一次

普通DNA提取的话不需要低温，室温就可以了。
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8楼2014-07-23 09:49:09
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-23 01:10:18
无水乙醇沉淀后用百分之七漂洗过吗？
...

用的是75%漂洗的
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9楼2014-07-23 09:50:37
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-23 01:39:05
低温（一般4°）最大转速，其中低温是重点，转速并不会影响DNA溶解
如果DNA不易溶有可能是干燥过久，或者是杂质过多
酚氯仿抽提时有没有加异戊醇？
无水酒精洗涤后可以再用70%酒精洗一次

有异戊醇，但异戊醇影响应该不大，只是除泡剂，还有我很想知道为什么这里低温是重点，还有个问题就是用无水乙醇沉淀DNA，为什么普遍转速高，高转速目的是什么啊
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10楼2014-07-23 09:53:59
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